Cynhyrchu inswlin peirianneg enetig

Inswlin - hormon pancreatig sy'n rheoleiddio | metaboledd carbohydrad a chynnal lefel arferol o cazdpayn y gwaed. Mae diffyg yr hormon hwn yn y corff yn arwain.) I un o'r afiechydon mwyaf difrifol - diabetes, sydd, fel achos marwolaeth, yn y trydydd safle ar ôl afiechydon cardiofasgwlaidd a chanser. Mae inswlin yn globule bach | protein sy'n cynnwys 51 gweddillion asid amino ac sy'n cynnwys dwy gadwyn polypeptid wedi'u cysylltu gyda'i gilydd gan ddwy bont disulfide. Mae'n cael ei syntheseiddio ar ffurf rhagflaenydd ffetws un gadwyn, preproinsulin, sy'n cynnwys koi peptid signal canolog (23 gweddillion asid amino) a pheptid cysylltu 35-dolen (C-peptid). Pan fydd y peptid signal yn cael ei dynnu, mae proinsulin o 86 o weddillion asid amino yn cael ei ffurfio yn y gell, lle mae cadwyni inswlin A a B wedi'u cysylltu.C-neitweed, sy'n rhoi'r cyfeiriadedd angenrheidiol iddynt ar $ 3 ar y bond disulfide. Ar ôl datodiad proteinolytig y peptid C, mae inswlin yn cael ei ffurfio.

Mae sawl math o ddiabetes yn hysbys. Mae'r ffurf fwyaf difrifol, y mae angen inswlin ar y claf (ffurf sy'n ddibynnol ar inswlin o'r clefyd), yn cael ei hachosi gan farwolaeth ddethol celloedd sy'n syntheseiddio'r hormon hwn (celloedd ynysoedd Langerhans yn y pancreas). Mae math o diabetes mellitus, nad oes angen triniaeth ag inswlin ar ei gyfer, yn fwy cyffredin, gellir ei reoli gyda chymorth dietau priodol ac parthed:> ma. Yn nodweddiadol, ni ddefnyddir pancreas gwartheg a buwch yn y diwydiant cig a chanio ac fe'i rhoddir mewn wagenni oergell ar gyfer cwmnïau fferyllol lle mae echdynnu hormonau yn cael ei wneud. I gael 100 g cr! Mae inswlin thallig yn gofyn am 800-1000 kg o borthiant

Cyflawnwyd synthesis y ddwy gadwyn a chysylltiad eu bondiau disudfid i gael inswlin ym 1963 a 1965. tri thîm ymchwil yn UDA, China a'r Almaen. Ym 1980, datblygodd y cwmni o Ddenmarc, Novo Industri, ddull ar gyfer trosi inswlin moch yn inswlin dynol trwy ddisodli'r 30ain gweddillion alanîn yng nghadwyn B â gweddillion threonin. Nid oedd y ddau inswlin yn wahanol o ran gweithgaredd a hyd y gweithredu.

Dechreuodd y gwaith ar beirianneg genetig inswlin tua 20 mlynedd yn ôl. Ym 1978, ymddangosodd neges am gynhyrchu straen o Escherichia coli yn cynhyrchu rat proinsulin (UDA). Yn yr un flwyddyn, syntheseiddiwyd cadwyni inswlin dynol unigol trwy fynegiant o'u genynnau synthetig mewn celloedd.E.coli(Ffig. 5.11). Cafodd pob un o'r genynnau synthetig a gafwyd eu tiwnio i 3'-diwedd y genyn ensym (3-galactosidase a'i gyflwyno i'r plasmid fector(pBR322).CelloeddE.coliwedi eu trawsnewid gyda phlastidau ailgyfunol o'r fath, cynhyrchwyd proteinau hybrid (simnai) yn cynnwys darn o p-galactosidase ac peptid inswlin A neu B ynghlwm wrtho trwy weddillion methionine. Wrth brosesu protein simnai gyda bromid cyanogen, mae'r peptid yn cael ei ryddhau. Fodd bynnag, roedd yn anodd cau pontydd disulfide rhwng y cadwyni inswlin a ffurfiwyd.

Yn 1981, syntheseiddiwyd analog pro-inswlin, mini-C-pro-inswlin, lle disodlwyd y C-peptid 35-uned gan segment o chwe asid amino: arg-arg-gly-ser-lys-arg a dangoswyd ei fynegiant ynE.coli.

Ym 1980, ynysodd W. Gilbert a'i gydweithwyr mRNA inswlin o diwmor P-cell pancreatig llygod mawr a chawsant cDNA ohono gan ddefnyddio gwrthdroi transcriptase. Mewnosodwyd y cDNA o ganlyniad i'r plasmidpBR322E.coliyn rhan ganol y genyn penisilinase. Roedd y plasmid ailgyfunol yn cynnwys gwybodaeth am strwythur proinsulin.O ganlyniad i gyfieithu mRNA, syntheseiddiwyd protein hybrid yn y celloedd sy'n cynnwys dilyniannau penisilinase a proinsulin, a dreuliwyd â trypsin o brotein o'r fath.

Ym 1978, gweithwyr y Sefydliad Cemeg Bioorganig dan oruchwyliaeth Acad. Syntheseiddiwyd Yu A. A. Ovchinnikov, dau enyn strwythurol sy'n amgodio synthesis niwropeptidau:leucine- enkefflin a bradykinin.Roedd gan y genyn enkefflin leucine syntheseiddiedig ddau ben “gludiog”:

Mewnosodwyd y genyn synthetig canlyniadol ynghyd â darn DNA naturiol sy'n cynnwys hyrwyddwr a rhan agosrwydd genyn protein E. coli P-galactosidaseE.colii'r plasmid

Cael inswlin, dulliau peirianneg enetig, Biotechnoleg - Gwaith Cwrs

1. Strwythur a swyddogaethau inswlin 5

1.1. Strwythur y moleciwl inswlin 5

1.2. Arwyddocâd biolegol inswlin 7

1.3. Biosynthesis Inswlin 8

2. synthesis inswlin peirianneg enetig 10

2.1. Defnyddio dulliau peirianneg genetig ar gyfer synthesis cyffuriau 10

2.2. Dulliau Peirianneg Genetig 11

2.3. Cynhyrchu inswlin peirianneg enetig 14

Detholiad o'r testun

At hynny, gall y ddwy gydran hyn fod yn bresennol ar yr un pryd yng nghyfansoddiad y protein hybrid. Yn ogystal, wrth greu proteinau hybrid, gellir defnyddio egwyddor amlddimensiwn - presenoldeb sawl copi o'r polypeptid targed yn y protein hybrid, a all gynyddu cynnyrch y cynnyrch targed yn sylweddol.

Yn y DU, syntheseiddiwyd y ddwy llinyn o inswlin dynol gan ddefnyddio E. coli, wedi'i gysylltu â moleciwl o hormon gweithredol yn fiolegol. Er mwyn i organeb ungellog syntheseiddio moleciwlau inswlin ar ei ribosomau, mae angen cyflenwi'r rhaglen angenrheidiol iddo, hynny yw, cyflwyno'r genyn hormonau iddo.

Cafwyd inswlin ailgyfannol yn Sefydliad Academi Gwyddorau Rwsia gan ddefnyddio mathau o E. coli a beiriannwyd yn enetig. Mynegir protein rhagflaenydd hybrid o'r biomas a dyfir, wedi'i fynegi mewn meintiau

40. o gyfanswm y protein cellog sy'n cynnwys preproinsulin.

Mae ei drawsnewidiad i inswlin in vitro yn cael ei wneud yn yr un dilyniant ag in vivo - mae'r polypeptid blaenllaw yn cael ei glirio, mae preproinsulin yn cael ei drawsnewid i inswlin trwy gamau sulfitolysis ocsideiddiol, ac yna cau tri bond disulfide yn lleihaol ac ynysu ensymatig y C-peptid rhwymol. Ar ôl cyfres o buriadau cromatograffig cyfnewid ïonau, gel a HPLC, ceir inswlin dynol o burdeb uchel a gweithgaredd naturiol.

I gael inswlin, defnyddir straen gyda dilyniant niwcleotid wedi'i fewnosod yn y plasmid sy'n mynegi protein hybrid sy'n cynnwys proinsulin llinol a darn o brotein A Staphylococcus aureus A ynghlwm wrth ei N-derfynfa trwy weddillion methionine 8, 9, 10.

Mae tyfu biomas dirlawn celloedd y straen ailgyfunol yn darparu dechrau cynhyrchu protein hybrid, y mae ei ynysu a'i drawsnewid dilyniannol mewn tiwb yn arwain at inswlin.

Mae ffordd arall hefyd yn bosibl: cael yn y system facteria mynegiant o brotein ailgyfunol sy'n cynnwys proinsulin dynol a chynffon polyhistidine ynghlwm wrtho trwy weddillion methionine. Mae'n cael ei ynysu gan ddefnyddio cromatograffeg chelad ar golofnau â holltiad Ni-agarose a bromin.

Mae'r protein ynysig yn S-sulfonedig. Mae mapio a dadansoddiad sbectrometreg màs o'r proinsulin a gafwyd wedi'i buro gan gromatograffaeth cyfnewid ïon ar resin cyfnewid anion a chromatograffeg hylif perfformiad uchel RP (cam gwrthdroi) yn dangos presenoldeb pontydd disulfide sy'n cyfateb i bontydd disulfide proinsulin dynol brodorol.

Yn ddiweddar, rhoddwyd sylw manwl i symleiddio'r weithdrefn ar gyfer cynhyrchu inswlin ailgyfunol trwy beirianneg genetig.Felly, er enghraifft, gallwch gael protein sy'n cynnwys proinsulin ynghlwm wrth y N-derfynfa trwy weddillion lysin peptid yr arweinydd interleukin

2. Mae'r protein yn cael ei fynegi a'i leoleiddio'n effeithiol mewn cyrff cynhwysiant. Ar ôl ynysu, mae'r protein i gynhyrchu inswlin a C-peptid wedi'i glirio â trypsin 5, 8, 10.

Mae'r inswlin a'r C-peptid sy'n deillio o hyn yn cael eu puro gan RP-HPLC. Yn arwyddocaol iawn wrth greu strwythurau wedi'u hasio yw cymhareb masau'r protein cludwr a'r polypeptid targed.

Mae C-peptidau gyda chymorth gwahanwyr asid amino sy'n cario safle cyfyngiad Sfi I a dau weddillion arginine ar ddechrau ac ar ddiwedd y spacer ar gyfer treuliad trypsin protein dilynol wedi'u cysylltu yn unol ag egwyddor y gynffon pen.

Mae HPLC y cynhyrchion holltiad yn dangos bod holltiad y C-peptid yn mynd yn ei flaen yn feintiol, ac mae hyn yn caniatáu defnyddio genynnau synthetig amlimerig i gynhyrchu polypeptidau targed ar raddfa ddiwydiannol.

Casgliad

Hyd yma, yr unig ffordd i gynnal bywyd a gallu gwaith cleifion â diabetes mellitus yw inswlin hyd yma.

Cyn derbyn a chyflwyno inswlin i ymarfer clinigol, roedd disgwyl canlyniad angheuol am flwyddyn neu ddwy o ddechrau'r afiechyd cleifion diabetes math I, er gwaethaf y defnydd o'r dietau mwyaf gwanychol.

Mae angen therapi amnewid gydol oes ar gleifion diabetes Math I gyda pharatoadau inswlin. Mae rhoi’r gorau i roi inswlin yn rheolaidd am ryw reswm neu’i gilydd yn arwain at ddatblygiad cymhlethdodau yn gyflym a marwolaeth gyflym y claf.

Ar hyn o bryd, mae nifer yr achosion o ddiabetes yn y trydydd safle ar ôl afiechydon y system gardiofasgwlaidd a thiwmorau malaen. Mae nifer yr achosion o ddiabetes ymysg oedolion, yn ôl Sefydliad Iechyd y Byd, yn y rhan fwyaf o ranbarthau'r byd yn 2-5% ac yn tueddu i gynyddu pob

1. blynyddoedd o nifer y cleifion bron â dyblu. Mae nifer y cleifion sy'n ddibynnol ar inswlin, er gwaethaf y cynnydd amlwg ym maes gofal iechyd, yn cynyddu bob blwyddyn, ac ar hyn o bryd yn Rwsia yn unig mae tua 2 filiwn o bobl.

Y dulliau mwyaf addawol ar gyfer cynhyrchu inswlin yw dulliau peirianneg genetig. Mae inswlin wedi'i beiriannu'n enetig ar gael trwy gynhyrchu cadwyni A a B ar wahân gan ddefnyddio gwahanol fathau o gynhyrchwyr a phlygu'r moleciwl wedi hynny, ac yna gwahanu isofformau, a synthesis proinsulin yng nghelloedd E. Coli gyda'i holltiad â trypsin a carboxypeptidase a chynhyrchu inswlin brodorol.

Mae datblygu paratoadau inswlin dynol domestig a beiriannwyd yn enetig yn agor posibiliadau newydd ar gyfer datrys llawer o broblemau diabetoleg Rwseg er mwyn achub bywydau miliynau o bobl â diabetes.

Llenyddiaeth

Balabolkin M.I., Klebanova E.M., Kreminskaya V.M. Diabetes mellitus: agweddau modern ar ddiagnosis a thriniaeth / Doctor, gol. G.L. Vyshkovsky.-2005.- M.: RLS-2005, 2004.- 960 t.

Gavrikov, A.V. Optimeiddio cynhyrchu biotechnolegol sylweddau ymyriadau dynol ailgyfunol: dis. ... cand. biol. Gwyddorau - M, 2003

Inswlin dynol wedi'i beiriannu'n enetig. Cynyddu effeithlonrwydd gwahanu cromatograffig gan ddefnyddio egwyddor dwyieithrwydd. / Romanchikov A.B., Yakimov S.A., Klyushnichenko V.E., Arutunyan A.M., Wulfson A.N. // Cemeg Bioorganig, 1997 - 23, Rhif 2

Glick B., Pasternak J. Rheoli'r defnydd o ddulliau biotechnolegol // B. Glick, J. Parsnip / Biotechnoleg Moleciwlaidd = Biotechnoleg Foleciwlaidd. - M .: Mir, 2002 .-- S. 517-532. - 589 t.

Glick B., Pasternak J. Biotechnoleg Moleciwlaidd. Egwyddorion a chymhwyso. M.: Mir, 2002.

Davis R., Botstein D, Roth J. Dulliau peirianneg genetig. Geneteg bacteria // R. Davis, D. Botstein, J. Roth / Per. o'r Saesneg.-M .: Mir. - 1984.- 176 t.

Ermishin A.P.Organebau a Addaswyd yn Enetig: Mythau a Realiti / A.P. Ermishin // Mn.: Tekhnalogaliya.- 2004. - 118 t.

Hanfodion Biotechnoleg Fferyllol: Gwerslyfr / TP Prischep, V.S. Chuchalin, K.L. Zaykov, L.K. Mikhaleva. - Rostov-on-Don.: Phoenix, Tomsk: Tŷ Cyhoeddi NTL, 2006.

Systemau genetig artiffisial Patrushev L.I. // L.I. Patrushev / M..: Nauka.- 2004.

Romanchikov, A.B. Inswlin dynol wedi'i beiriannu'n enetig. Cynyddu effeithlonrwydd gwahanu cromatograffig gan ddefnyddio egwyddor dwyieithrwydd. / A.B. Romanchikov ac eraill.

// Cemeg Bioorganig. 1997. Rhif 2. t. 23

Hanfodion Rybchin V.N. Peirianneg Genetig // V.N. Rybchin / 2il arg., Diwygiedig. ac ychwanegu.: Gwerslyfr i brifysgolion. SPb.: Tŷ cyhoeddi SPbSTU. - 2002 .-- 522 s.

Schelkunov S. N. Peirianneg enetig // Schelkunov S. N. / Novosibirsk: Sib. univ. Tŷ Cyhoeddi. 2008.

Schelkunov, S.N. Peirianneg enetig: gwerslyfr. lwfans. - 2il, gol., Parch. ac ychwanegu. - Novosibirsk: Sib. univ. Tŷ Cyhoeddi, 2004 .-- 496 t.

1. Lleoliad bondiau disulfide yn y moleciwl inswlin.

2. Trefniant gweddillion asid amino yn y moleciwl inswlin

Effaith inswlin ar ensymau metabolaidd allweddol

Ysgogi meinwe adipose Cyhyrau'r Afu 1. Ffosffodiesterase 1. Phosphodiesterase 1. LP-lipase

4. Cymhleth Pyruvate dehydrogenase

4. Cymhleth Pyruvate dehydrogenase

5. Synthase glycogen ffosffatase a phosphorylase glycogen

5. Glycogen synthase phosphatase b. Sefydlu Asetyl-CoA-carboxylase 1. Glucokinase 1. Dehydrogenase ffosffad glyceraldehyde

6. Gostyngiad-6-ffosffad dehydrogenase Gormes Phosphoenolpyruvate carboxykinase

Ffig. 3 Cynllun biosynthesis inswlin mewn β-gelloedd ynysoedd Langerhans. ER - reticulum endoplasmig. 1 - ffurfio peptid signal, 2 - synthesis o preproinsulin, 3 - holltiad y peptid signal, 4 - cludo proinsulin i gyfarpar Golgi, 5 - trosi proinsulin yn inswlin a C-peptid a chynnwys inswlin a C-peptid yn gronynnau cyfrinachol, 6 - secretiad inswlin. a C peptid.

4. Cynllun cyffredinol ar gyfer synthesis inswlin gan ei ragflaenwyr

Ffig. 5 Synthesis o inswlin trwy ffurfio dwy gadwyn ar wahân

Y dull o gael inswlin dynol wedi'i beiriannu'n enetig

Mae'r ddyfais yn ymwneud â maes biotechnoleg, ac yn benodol â chynhyrchu inswlin dynol a beiriannwyd yn enetig ar gyfer cynhyrchu cyffuriau a ddefnyddir i drin diabetes mellitus.

Gwneir y dull trwy drin straen cynhyrchydd o brotein hybrid sy'n cynnwys proinsulin dynol, Escherichia coli BL21 / pPINS07 (BL07) neu Escherichia coli JM109 / pPINS07, gan amharu ar y celloedd trwy ddadelfennu, gan wahanu cyrff cynhwysiant sy'n cynnwys y protein hybrid.

Nesaf, mae cyrff rhagarweiniol yn cael eu golchi yn rhagarweiniol, diddymu'r protein ar yr un pryd ac adfer bondiau disulfide mewn byffer â 5-10 mM dithiothreitol ac 1 mM EDTA, ail-amsugno a phuro'r protein ymasiad wedi'i ail-gartrefu trwy gromatograffaeth cyfnewid ïon.

Mae holltiad y protein hybrid yn cael ei wneud trwy hydrolysis ar y cyd trypsin a carboxypeptidase B ar gymhareb pwysau o'r protein hybrid, trypsin a carboxypeptidase B 4000: 0.6: 0.9.

Mae puro inswlin yn cael ei wneud trwy gromatograffeg hydroffobig neu gromatograffaeth hylif perfformiad uchel cam wrthdroi ac yna hidlo gel, ac ynysu inswlin trwy grisialu ym mhresenoldeb halwynau sinc. Mae'r ddyfais yn caniatáu lleihau'r broses o gael inswlin dynol wedi'i beiriannu'n enetig a chynyddu ei allbwn.

Mae'r ddyfais yn ymwneud â maes biotechnoleg, ac yn benodol â chynhyrchu inswlin dynol a beiriannwyd yn enetig ar gyfer cynhyrchu cyffuriau a ddefnyddir i drin diabetes mellitus.

Gan ystyried prif gyflawniadau diabetoleg fodern ac argymhellion Sefydliad Iechyd y Byd, roedd gwledydd Ewropeaidd erbyn 2001 wedi cwblhau'r newid i ddefnyddio inswlin dynol. Yn hyn o beth, mae datblygu dulliau ar gyfer cynhyrchu inswlin gan ddefnyddio dulliau technoleg ailgyfuno DNA yn dasg frys.

Dull hysbys ar gyfer cynhyrchu inswlin dynol wedi'i beiriannu'n enetig, sy'n cynnwys meithrin straen cynhyrchydd E. Coli sy'n cynhyrchu proinsulin, sy'n cynnwys dilyniant o ddau barth rhwymo IgG synthetig o brotein staphylococcal A.

Mae'r dull yn cynnwys dinistrio celloedd bacteriol, cael Taurus cynhwysiant sy'n cynnwys proinsulin, hydoddi Taurus cynhwysiant, sulfitolysis ocsideiddiol proinsulin, ei ail-haenu, puro'r protein wedi'i ail-gylchu trwy gromatograffaeth affinedd, holltiad Proinsulin ag ensymau proteinolytig (trypsin a charboxypeptidase B) a phuro terfynol inswlin â phuriad effeithlonrwydd uchel. cromatograffeg (Nilson J., Jonasson P., Samuelsson E., Stahl S., Uhlen M. "Cynhyrchu integredig o inswlin dynol a'i C-peptid", Journal of biotechnology, 1996, v. 48, t. 241-250) .

Anfanteision y dull hwn yw cost uchel y cynnyrch a'r defnydd wrth gynhyrchu glanedydd inswlin, a allai fod yn bresennol yn y cynnyrch targed.

Dull hysbys o gynhyrchu inswlin dynol a beiriannwyd yn enetig, sy'n cynnwys tyfu celloedd y cynhyrchydd straen E.

Mae Coli DN5 a / pVK100, yn dinistrio celloedd bacteriol trwy ddadelfennu ultrasonic, cyrff cynhwysiant ar wahân sy'n cynnwys y protein hybrid o amhureddau sy'n hydoddi mewn dŵr trwy centrifugio, yn toddi'r cyrff cynhwysiant mewn byffer sy'n cynnwys 8 M wrea, 1 mM dithiothreitol, 0.1 M Tris-HCl, pH 8.0, am 12-16 awr.

Mae amhureddau anhydawdd yn cael eu tynnu trwy centrifugio, ac ar ôl hynny mae crynodiad dithiothreitol yn cael ei gynyddu i 10 mM ac mae bondiau disulfide yn cael eu hadfer ar 37 ° C am 1 awr. Cafodd yr hydoddiant ei wanhau 5 gwaith â dŵr oer, ei addasu i pH 4.5 a'i ddeor am 2 awr ar 4 ° C i ffurfio gwaddod.

Cafodd y gwaddod sy'n cynnwys y protein hybrid ei wahanu gan centrifugation a'i ail-raddio, ei doddi'n gyflym mewn dŵr oer ar pH o 10-12, ac ar ôl hynny cafodd ei wanhau â byffer glycin 10 mM, pH 10.8, a'i gadw ar 4 ° C dros nos. Ar ôl ultrafiltration, roedd yr hydoddiant yn destun hidlo gel ar golofn Sephadex G-50 a'i echdynnu â byffer glycin 10 mM.

Mae ffracsiynau sy'n cynnwys y protein ymasiad yn cael eu casglu, eu ultrafiltered, a'u rhewi-sychu. Mae'r protein ymasiad sy'n deillio o hyn yn cael ei doddi mewn byffer 0.08 M Tris-HCl, pH 7.5, i grynodiad o 10 mg / ml a'i glirio ar yr un pryd â trypsin a carboxypeptidase B (cymhareb carboxypeptidase B: trypsin: protein ymasiad 0.3: 1: 10) yn 37 ° C am 30 munud.

Yna ychwanegwch isopropanol i 40%. Mae'r gymysgedd yn cael ei gromatograffu ar golofn DEAE-Sephadex A-25 a'i eluted â byffer Tris-HCl 0.05 M, pH 7.5 gyda 40% isopropanol gyda graddiant llinellol o sodiwm clorid o 0 i 0.1 m. Ar ôl tynnu isopropanol, crynodiad sodiwm clorid. cynyddu i 25%, symud y pH i 2.0 a chasglu gwaddod inswlin.

(Chen J.-Q., Zhang H.-T., Hu M.-N., Tang J.-G., “Cynhyrchu inswlin dynol mewn system E. Coli gyda proinsulin met-lys-dynol fel y mynegwyd rhagflaenydd "Biocemeg Gymhwysol a Biotechnoleg, 1995, v. 55, t. 5-15).

Mae anfanteision y dull hwn yn cynnwys defnyddio hidlo gel yn y camau cychwynnol, sy'n gofyn am symiau sylweddol o sorbent a nifer fawr o ensymau a ddefnyddir wrth hollti'r protein hybrid.

Dull hysbys ar gyfer cynhyrchu inswlin dynol a beiriannwyd yn enetig, gan gynnwys meithrin straen cynhyrchydd o Escherichia coli JM109 / pPINS07, dinistrio celloedd bacteriol trwy ddadelfennu, gwahanu cyrff cynhwysiant sy'n cynnwys protein hybrid, eu toddi mewn byffer sy'n cynnwys wrea a dithiothreitol, eu rhentu a phuro'r protein hybridedig wedi'i rentu. dyodiad cyfansoddion amhuredd mewn 40% isopropanol ac yna cromatograffeg ar KM-sepharose, ei holltiad dilyniannol gyda trypsin a carboxypeptidase B, tra bod y cynhyrchion Mae trypsinolysis yn cael ei gromatograffu ar SP-Sepharose, wedi'i gydbwyso â byffer asetad amoniwm 0.03-0.1 M pH 5.0-6.0 sy'n cynnwys 6 M wrea, gydag elution protein gyda graddiant llinellol o sodiwm clorid o 0 i 0.5 M yn y dechrau byffer, a phuredigwyd y ffracsiwn inswlin a gafwyd ar ôl holltiad â carboxypeptidase B gan gromatograffaeth hylif perfformiad uchel cam wrthdro (RP HPLC) ac yna hidlo gel (Pat. RF Rhif 2141531, MKI C12P 21/02, publ. 1999)

Mae anfanteision y dull yn cynnwys defnyddio meintiau sylweddol o wrea a thoddyddion organig ar adeg puro'r protein hybrid.

Arbenigwr diabet

Cyn defnyddio inswlin, nid oedd disgwyliad oes claf â diabetes mellitus yn fwy na 10 mlynedd. Mae dyfeisio'r cyffur hwn wedi arbed miliynau o gleifion. Inswlin peirianneg genetig dynol yw'r cynnydd diweddaraf mewn gwyddoniaeth.

Canlyniad blynyddoedd lawer o waith caled

Cyn dyfeisio'r paratoad peirianneg genetig (ailgyfunol), roedd inswlin wedi'i ynysu oddi wrth pancreas gwartheg a moch.

Dim ond un asid amino yw'r gwahaniaeth rhwng inswlin mochyn a dynol

Anfanteision y dull hwn o gael y cyffur:

• cymhlethdod storio a chludo deunyddiau crai biolegol,
• diffyg da byw
• anawsterau sy'n gysylltiedig â dyrannu a phuro hormon pancreatig,
• risg uchel o adweithiau alergaidd.

Gyda synthesis inswlin dynol naturiol yn y bioreactor ym 1982, cychwynnodd oes biotechnolegol newydd. Os mai dim ond goroesiad y claf oedd nod gwyddonwyr, ond yn ein hamser ni mae datblygu cyffuriau newydd wedi'i anelu at sicrhau iawndal cynaliadwy am y clefyd. Prif nod ymchwil wyddonol yw gwella ansawdd bywyd claf â diabetes.

Technoleg fodern

Mathau o gyffur, yn dibynnu ar y dull paratoi:

Beth sy'n digwydd yn y corff ar ôl rhoi cyffuriau?

Gan gysylltu â derbynnydd y gellbilen, mae inswlin yn ffurfio cymhleth sy'n gweithredu'r prosesau canlynol:

1. Yn gwella cludo glwcos mewngellol ac yn hwyluso ei amsugno.
2. Yn hyrwyddo rhyddhau ensymau sy'n ymwneud â phrosesu glwcos.
3. Yn lleihau cyfradd ffurfio glycogen yn yr afu.
4. Yn ysgogi metaboledd braster a phrotein.

Yn achos gweinyddiaeth isgroenol, mae inswlin yn dechrau gweithredu mewn 20-25 munud. Hyd y cyffur o 5 i 8 awr. Mae'n cael ei glirio ymhellach gan yr ensym inswlin a'i ysgarthu yn yr wrin. Nid yw'r cyffur yn croesi'r brych ac nid yw'n pasio i laeth y fron.

Pryd mae inswlin wedi'i beiriannu'n enetig yn cael ei ragnodi?

Os oes angen help ar frys

Defnyddir inswlin dynol wedi'i beiriannu'n enetig yn yr achosion canlynol:

1. Diabetes math 1 neu fath 2. Fe'i defnyddir fel triniaeth annibynnol neu mewn cyfuniad â chyffuriau eraill.
2. Gyda gwrthiant i gyfryngau hypoglycemig llafar.
3. Gyda diabetes mewn menywod beichiog.
4. Mewn achos o gymhlethdodau o'r arennau a'r afu.
5. Wrth newid i inswlin hir-weithredol.
6. Yn y cyfnod cyn llawdriniaeth.
7. Yn achos amodau sy'n peryglu bywyd (coma hyperosmolar neu ketoacidotic).
8. Mewn sefyllfaoedd brys (cyn genedigaeth, gydag anafiadau).
9. Os oes briwiau croen dystroffig (wlserau, furunculosis).
10. Trin diabetes yn erbyn cefndir yr haint.

Mae inswlin peirianneg genetig dynol yn cael ei oddef yn dda ac nid yw'n achosi adweithiau alergaidd, gan ei fod yn hollol union yr un fath â'r hormon naturiol.

Mae monitro cyson yn bwysig!

Gwaherddir rhagnodi meddyginiaeth rhag ofn:

• gostwng siwgr gwaed
• gorsensitifrwydd y cyffur.

Yn y dyddiau cyntaf ar ôl penodi'r cyffur, mae angen monitro'r claf yn ofalus.

Sgîl-effeithiau

Perygl Urticaria! Edema Quincke!

Mewn achosion prin, wrth ddefnyddio inswlin, mae'r cymhlethdodau canlynol yn bosibl:

• adweithiau alergaidd (wrticaria, oedema Quincke, cosi y croen),
• gostyngiad sydyn mewn siwgr yn y gwaed (yn datblygu oherwydd bod y corff wedi gwrthod y cyffur neu os bydd gwrthdaro imiwnolegol),
• ymwybyddiaeth amhariad
• mewn achosion difrifol, mae datblygu coma hypoglycemig yn bosibl,
• syched, ceg sych, syrthni, colli archwaeth bwyd,
• hyperglycemia (wrth ddefnyddio'r cyffur yn erbyn cefndir o haint neu dwymyn),
• cochni wyneb
• adweithiau lleol ym maes gweinyddu (llosgi, cosi, atroffi neu amlhau braster isgroenol).

Weithiau mae anhwylderau fel chwyddo a nam ar y golwg yn cyd-fynd ag addasu i'r cyffur. Mae'r amlygiadau hyn fel arfer yn diflannu ar ôl ychydig wythnosau.

Sut i ddod o hyd i inswlin wedi'i beiriannu'n enetig mewn fferyllfa?

Mae'r feddyginiaeth ar gael ar ffurf datrysiad ar gyfer rhoi parenteral:

Nid yw'n anodd dewis paratoad inswlin gan ystyried nodweddion unigol y claf.

Telerau defnyddio

Yn fwyaf aml, defnyddir inswlin trwy'r croen.

Mewn achosion brys, rhoddir y cyffur yn fewnwythiennol.

Mewn cyflwr difrifol i'r claf

Gall hyd yn oed diabetig sydd â phrofiad wneud camgymeriad wrth ddefnyddio'r cyffur.

Er mwyn osgoi cymhlethdodau, mae'n angenrheidiol:

1. Cyn ei ddefnyddio, gwiriwch ddyddiad dod i ben y feddyginiaeth.
2. Dilynwch argymhellion storio: Dylid storio ffiolau sbâr yn yr oergell. Gellir storio'r ffiol ddatblygedig ar dymheredd yr ystafell mewn lle tywyll.
3. Gwnewch yn siŵr eich bod yn cofio'r dos cywir: darllenwch bresgripsiwn y meddyg eto.
4. Cyn pigiad, mae'n hanfodol rhyddhau aer o'r chwistrell.
5. Dylai'r croen fod yn lân, ond mae'n annymunol defnyddio alcohol i'w brosesu, gan ei fod yn lleihau effeithiolrwydd y cyffur.
6. Dewiswch y lle gorau ar gyfer pigiad. Pan gaiff ei gyflwyno o dan groen yr abdomen, bydd y cyffur yn gweithredu'n gyflymach. Amsugno arafach inswlin wrth ei gyflwyno i'r plyg gluteal neu'r ysgwydd.
7. Defnyddiwch yr arwynebedd cyfan (atal cymhlethdodau lleol). Dylai'r pellter rhwng pigiadau fod o leiaf 2 cm.
8. Gafaelwch yn y croen yn y grim er mwyn lleihau'r risg o fynd i'r cyhyrau.
9. Chwistrellwch y chwistrell o dan y croen ar ongl fel nad yw'r feddyginiaeth yn gollwng.
10. Pan gaiff ei chwistrellu i'r stumog, rhoddir inswlin dros dro 20 munud cyn pryd bwyd. Mewn achos o ddewis ysgwydd neu ben-ôl - tri deg munud cyn pryd bwyd.

Cyfuniad â chyffuriau eraill

Yn aml gyda diabetes, mae'r claf yn cymryd sawl meddyginiaeth. Gall y cyfuniad â chyffuriau eraill effeithio ar effaith therapiwtig inswlin a beiriannwyd yn enetig.

Er mwyn atal cymhlethdodau, mae angen i chi wybod:

Gorddos

Mewn rhai achosion, mae rhoi inswlin yn arwain at ostyngiad sydyn mewn siwgr yn y gwaed. Mae'r broblem yn aml yn codi oherwydd dewis dos amhriodol.

Symptomau cychwynnol hypoglycemia:

• gwendid
• pallor y croen
• cyflwr pryder
• pendro
• disorientation
• fferdod breichiau, coesau, tafod a gwefusau,
• aelodau crynu
• chwys oer
• teimlad cryf o newyn
• cur pen.

Cryndod; dirywiad sydyn mewn lles

Os byddwch chi'n sylwi ar symptomau o'r fath ynoch chi'ch hun, mae angen i chi fwyta rhywbeth sy'n cynnwys carbohydradau hawdd eu treulio. Gall fod yn gwcis, candy, darn o siwgr neu fara gwyn. Mae te melys yn helpu mewn sefyllfaoedd o'r fath.

Os bydd y cyflwr yn gwaethygu, rhaid i chi ffonio ambiwlans. Gall hypoglycemia arwain at goma neu farwolaeth y claf.

A yw inswlin ailgyfunol yn beryglus?

Helo Nid yw inswlin ailgyfannol yn wahanol i naturiol. Er mwyn ei gael, defnyddir bacteria a addaswyd yn enetig.

Gan ddefnyddio technolegau peirianneg genetig, mae DNA ailgyfunol sy'n cynnwys y genyn inswlin yn cael ei fewnblannu i gell E. coli. Mae organebau a addaswyd yn enetig yn lluosi ac yn cynhyrchu hormon. Mae'r cyffur yn effeithiol iawn ac mae ganddo radd uchel o buro.

Inswlin Rhan II Cynhyrchu inswlin microbiolegol

cydran affinedd - hwyluso ynysu'r protein hybrid yn sylweddol.

At hynny, gall y ddwy gydran hyn fod yn bresennol ar yr un pryd yng nghyfansoddiad y protein hybrid.

Yn ogystal, wrth greu proteinau hybrid, gellir defnyddio egwyddor amlddimensiwn (hynny yw, mae sawl copi o'r polypeptid targed yn bresennol yn y protein hybrid), a all gynyddu cynnyrch y cynnyrch targed yn sylweddol.

2 Mynegiant proinsulin mewn celloedd E. coli.

Yn y gwaith, defnyddiodd yr awduron straen JM 109 N1864 gyda dilyniant niwcleotid wedi'i fewnosod yn y plasmid yn mynegi protein hybrid, sy'n cynnwys proinsulin llinol a darn o brotein A Staphylococcus aureus ynghlwm wrth ei N-derfynfa trwy'r gweddillion methionine.

Mae tyfu biomas dirlawn celloedd y straen ailgyfunol yn darparu dechrau cynhyrchu protein hybrid, y mae ei ynysu a'i drawsnewid dilyniannol mewn tiwb yn arwain at inswlin.

Derbyniodd grŵp arall o ymchwilwyr brotein ailgyfunol yn cynnwys proinsulin dynol a chynffon poly-histidine ynghlwm wrtho trwy weddillion methionine yn system mynegiant bacteriol ymasiad. Cafodd ei ynysu gan ddefnyddio cromatograffeg chelad ar golofnau Ni-agarose gan gyrff cynhwysiant a'i dreulio â bromid cyanogen.

Dangosodd mapio a dadansoddiad sbectrometreg màs o'r proinsulin a gafwyd wedi'i buro gan gromatograffaeth cyfnewid ïon ar resin cyfnewid anion a RP (cam gwrthdroi) HPLC (cromatograffeg hylif perfformiad uchel) bresenoldeb pontydd disulfide sy'n cyfateb i bontydd disulfide proinsulin dynol brodorol. Mae'r papur yn adrodd ar ddatblygu dull newydd, gwell ar gyfer cynhyrchu inswlin dynol trwy beirianneg genetig mewn celloedd procaryotig. Canfu'r awduron fod yr inswlin sy'n deillio o hyn yn ei strwythur a'i weithgaredd fiolegol yn union yr un fath â'r hormon sydd wedi'i ynysu o'r pancreas.

Yn ddiweddar, rhoddwyd sylw manwl i symleiddio'r weithdrefn ar gyfer cynhyrchu inswlin ailgyfunol trwy beirianneg genetig. Felly, cafodd yr awduron brotein ymasiad a oedd yn cynnwys peptid arweinydd interleukin 2 ynghlwm wrth N-derfynfa proinsulin trwy'r gweddillion lysin.

Mynegwyd a lleolwyd y protein yn effeithlon mewn cyrff cynhwysiant. Ar ôl ynysu, treuliwyd y protein â trypsin i gynhyrchu inswlin a C-peptid. Gweithredodd grŵp arall o ymchwilwyr mewn ffordd debyg.

Protein ymasiad sy'n cynnwys proinsulin a dau barth synthetig o staphylococcus Lleolwyd IgG sy'n rhwymo protein mewn cyrff cynhwysiant, ond roedd ganddo lefel mynegiant uwch. Cafodd y protein ei ynysu gan gromatograffaeth affinedd gan ddefnyddio IgG a'i brosesu â trypsin a carboxypeptidase B.

Cafodd yr inswlin a'r C-peptid o ganlyniad eu puro gan RP HPLC. Wrth greu strwythurau wedi'u hasio, mae cymhareb màs y protein cludwr a'r polypeptid targed yn arwyddocaol iawn.

Felly, mae'r gwaith yn disgrifio adeiladu strwythurau ymasiad, lle defnyddiwyd albwmwmwm serwm dynol sy'n rhwymo protein fel polypeptid cludwr. Roedd un, tri a saith C-peptid ynghlwm wrtho.

Cysylltwyd C-peptidau ar sail cynffon pen gan ddefnyddio gofodwyr asid amino sy'n cario safle cyfyngiad Sfi I a dau weddillion arginine ar ddechrau ac ar ddiwedd y spacer ar gyfer hollti protein wedi hynny â trypsin. Dangosodd HPLC o'r cynhyrchion holltiad fod holltiad y C-peptid yn feintiol, ac mae hyn yn caniatáu defnyddio genynnau synthetig amlimerig i gael polypeptidau targed ar raddfa ddiwydiannol.

Mae'r gwaith yn disgrifio paratoi'r mutant proinsulin, a oedd yn cynnwys disodli Arg32Tyr. Pan gafodd y protein hwn ei gyd-glirio â trypsin a carboxypeptidase B, ffurfiwyd inswlin brodorol a C-peptid sy'n cynnwys y gweddillion tyrosine. Defnyddir yr olaf, ar ôl labelu 125I, yn weithredol mewn radioimmunoassay. 3 Puro inswlin.

Rhaid i inswlin a fwriadwyd ar gyfer cynhyrchu cyffuriau fod o burdeb uchel. Felly, mae angen rheolaeth hynod effeithiol ar burdeb y cynhyrchion a geir ar bob cam o'r cynhyrchiad. Yn flaenorol, defnyddiwyd RPLC ac IO (cyfnewid ïon) HPLC i nodweddu proinsulin-S-sulfonate, proinsulin, cadwyni A- a B unigol, a'u S-sulfonadau.

Rhoddir sylw arbennig hefyd i'r deilliad inswlin fflwroleuol. Yn y gwaith, ymchwiliodd yr awduron i gymhwysedd ac addysgiadol dulliau cromatograffig wrth ddadansoddi cynhyrchion ar bob cam o gynhyrchu inswlin dynol a llunio amserlen o weithrediadau cromatograffig i wahanu a nodweddu'r cynhyrchion sy'n deillio o hyn yn effeithiol.

Yn ogystal, mae dulliau'n cael eu datblygu i awtomeiddio a chyflymu'r prosesau ar gyfer pennu purdeb a maint inswlin.

Mae'r papur yn adrodd ar astudiaethau o'r posibilrwydd o ddefnyddio cromatograffeg hylif RP gyda chanfod electrocemegol i bennu inswlin, a datblygwyd methodoleg ar gyfer pennu inswlin sydd wedi'i ynysu o ynys Langerhans trwy gromatograffaeth immunoaffinity gyda chanfod sbectrometreg.

Yn y gwaith, ymchwiliwyd i'r posibilrwydd o ddefnyddio micro-benderfyniad cyflym ar inswlin gan ddefnyddio electrofforesis capilaidd gyda chanfod laser-fflwroleuedd. Perfformir y dadansoddiad trwy ychwanegu at y sampl swm hysbys o inswlin wedi'i labelu â phenylisothiocyanate (FITC) a darn Fab o wrthgyrff inswlin monoclonaidd. Mae inswlinau wedi'u labelu a rheolaidd yn ymateb yn gystadleuol i gyfadeilad Fab. Mae inswlin wedi'i labelu gan FITZ a'i gymhleth â Fab wedi'u gwahanu mewn 30 eiliad.

Yn ddiweddar, mae nifer fawr o weithiau wedi'u neilltuo i wella dulliau ar gyfer cynhyrchu inswlin, yn ogystal â chreu ffurflenni dos yn seiliedig arno.

Er enghraifft, yn UDA, mae analogau inswlin hepatospecific yn cael eu patentio, yn strwythurol wahanol i hormon naturiol oherwydd cyflwyno gweddillion asid amino gwahanol yn safleoedd 13-15 a 19 o'r gadwyn A ac yn safle 16 y gadwyn B.

Defnyddir y analogau a gafwyd fel rhan o amrywiol ffurfiau dos parenteral (mewnwythiennol, mewngyhyrol, isgroenol), dos dos intranasal neu fewnblaniad ar ffurf capsiwlau arbennig wrth drin diabetes mellitus. Yn arbennig o berthnasol mae creu ffurflenni dos a roddir heb bigiad.

Mae'r papur yn adrodd ar greu system macromoleciwlaidd ar gyfer gweinyddiaeth lafar, sy'n ansymudol inswlin yng nghyfaint hydrogel polymer wedi'i addasu gydag atalyddion ensymau proteinolytig. Effeithiolrwydd cyffur o'r fath yw 70-80% o effeithiolrwydd inswlin brodorol a gyflwynwyd yn isgroenol.

Mewn gwaith arall, ceir cyffur trwy ddeoriad un cam o inswlin â chelloedd gwaed coch, a gymerir mewn cymhareb o 1-4: 100, ym mhresenoldeb asiant rhwymol.Mae'r awduron yn adrodd eu bod wedi derbyn cyffur gyda gweithgaredd o 1000 uned / g, cadw gweithgaredd yn llawn ar ôl ei roi a'i storio trwy'r geg am sawl blwyddyn ar ffurf lyoffiligedig.

Yn ogystal â chreu cyffuriau a ffurflenni dos newydd yn seiliedig ar inswlin, mae dulliau newydd yn cael eu datblygu i ddatrys problem diabetes.

Felly, trawsffurfiodd yr awduron cDNA protein cludwr glwcos GLUT2 cDNA a drawsnewidiwyd yn flaenorol â cDNA inswlin maint llawn o gelloedd ins HEP G2.

Yn y clonau InEPl HEP G2 a gafwyd, mae glwcos yn ysgogi'n agos at secretion inswlin arferol ac yn cryfhau'r ymateb cyfrinachol i symbylyddion secretion eraill.

Datgelodd microsgopeg immunoelectron ronynnau sy'n cynnwys inswlin yn forffolegol debyg i ronynnau yng nghelloedd b ynysoedd Langerhans. Mae'r posibilrwydd o ddefnyddio “cell b artiffisial” a gafwyd trwy ddulliau peirianneg genetig ar gyfer trin diabetes mellitus math 1 yn cael ei drafod o ddifrif ar hyn o bryd.

Ynghyd â datrys problemau ymarferol, astudir mecanweithiau gweithredu inswlin, ynghyd â chysylltiadau strwythurol a swyddogaethol yn y moleciwl. Un o'r dulliau ymchwil yw creu deilliadau amrywiol o inswlin ac astudio eu priodweddau ffisiocemegol ac imiwnolegol 23, 24.

Fel y soniwyd uchod, mae nifer o ddulliau ar gyfer cynhyrchu inswlin yn seiliedig ar gael yr hormon hwn ar ffurf rhagflaenydd (proinsulin), ac yna holltiad ensymatig i inswlin a C-peptid. Ar hyn o bryd, dangoswyd presenoldeb gweithgaredd biolegol ar gyfer y C-peptid, sy'n ei gwneud hi'n bosibl ei ddefnyddio at ddibenion therapiwtig ynghyd ag inswlin.

Yn erthyglau canlynol y gyfres hon, ystyrir priodweddau ffisiocemegol a biolegol y C-peptid, ynghyd â dulliau ar gyfer ei baratoi.

Biotechnoleg wrth gynhyrchu cyffuriau

O ddiddordeb yw'r datblygiadau ar gyfer cael fersiwn 20K o STGh. Tasg addawol yw sicrhau ac astudio nid yn unig amrywiol fathau o STH, ond hefyd STH ansymudol er mwyn cael gweithred hirfaith yr hormon. Mae dull gwreiddiol wedi'i ddatblygu ar gyfer cael STHch ansymudol gyda gweithred hirfaith.

Ochr yn ochr â chynhyrchu STH, crëwyd technoleg integredig wreiddiol ar gyfer cynhyrchu hormonau adenohypoffysis, gan gynnwys yr holl rai sy'n benodol i rywogaethau, a rhai o'u haddasiadau o GST. O bwysigrwydd mawr yw gweithredu rhaglen wedi'i thargedu i greu cyffur therapiwtig STH (somatogen), a geir trwy beirianneg genetig.

Mae profiad clinigol wedi dangos, wrth wneud y gorau o drin crebachu, y byddai'n syniad da cael sawl paratoad fferyllol tebyg yn yr arsenal a gafwyd gan amrywiol dechnolegau neu hyd yn oed ddulliau (MF, Ausomatin, Somatogen).

Mae triniaeth hirdymor (am flynyddoedd) gydag un paratoad o STHh yn achosi gostyngiad yn y sensitifrwydd ynddo yn y corff.

Yn rhannol, gall hyn fod o ganlyniad i ffurfio gwrthgyrff, ond rhaid ceisio'r prif reswm ar lefel y derbynyddion a phrosesu'r hormon.

Mae gweithio gyda GST, yn ogystal ag astudiaethau cynhwysfawr o hormonau cyfrinachol a'u gwahanol ffurfiau yn ei gwneud hi'n bosibl astudio'r systemau a grëir gan natur a'u deall yn well. Mae bodolaeth gwahanol ffurfiau brodorol o STH yn y corff yn nodi eu dichonoldeb a'u defnydd posibl, er enghraifft, mewn clinig.

Wrth greu paratoadau STHch newydd, mae angen yn gyntaf oll canolbwyntio ar ffurfiau naturiol brodorol yr hormon ac, os yw'n briodol, eu graddio trwy beirianneg genetig, fel sy'n cael ei wneud gyda'r monomer STHch.

Wrth gynhyrchu paratoadau STHch o GST, gweithredir technoleg ddiwydiannol gynhwysfawr ar gyfer cynhyrchu hormonau eraill yr adenohypoffysis (LGH, FSHch, TTGch ac eraill) yn llwyddiannus. Mae angen gwneud y gorau o'r cynhyrchiad trwy gyflwyno dulliau datblygedig newydd (cromatograffaeth affinedd, ac ati.

), derbyn hormonau pur iawn gan ddefnyddio technoleg integredig.

Mae angen ehangu cynhyrchiant a defnydd setiau o imiwnomicroanalysis o hormonau'r adenohypoffysis ar gyfer diagnosis a biotechnoleg, er mwyn cynhyrchu cynhyrchiad gwrthgyrff safonol o wahanol raddfeydd, i greu paratoadau STHch newydd, gan gynnwys rhai ansymudol.

Mae'r ffaith bod STH yn effeithio ar metaboledd protein, braster a mwynau, yn gweithredu ar lefel y gell heb organ darged, ac yn anabolig, yn rhoi rhagolygon gwych ar gyfer ei ddefnyddio i ysgogi prosesau atgyweirio a thrin afiechydon amrywiol. Mae astudiaeth ehangach o'r materion hyn, ynghyd â'r posibilrwydd o ddefnyddio amrywiol ffurfiau wedi'u haddasu ac amrywiadau o STGch, yn dasg frys ac addawol.

Cael inswlin mewn biotechnoleg

Inswlin, hormon peptid ynysoedd Langerhans y pancreas, yw'r brif driniaeth ar gyfer diabetes. Mae'r clefyd hwn yn cael ei achosi gan ddiffyg inswlin ac mae'n cael ei amlygu gan gynnydd mewn glwcos yn y gwaed. Tan yn ddiweddar, cafwyd inswlin o pancreas tarw a mochyn.

Roedd y cyffur yn wahanol i inswlin dynol gan amnewidiadau asid amino 1-3, fel bod bygythiad o adweithiau alergaidd, yn enwedig mewn plant. Cyfyngwyd ar y defnydd therapiwtig eang o inswlin gan ei gost uchel a'i adnoddau cyfyngedig.

Trwy addasu cemegol, gwnaed inswlin o anifeiliaid yn wahanol i fodau dynol, ond roedd hyn yn golygu cynnydd ychwanegol ym mhris y cynnyrch.

Er 1982, mae EliLilly wedi bod yn cynhyrchu inswlin wedi'i beiriannu'n enetig yn seiliedig ar synthesis ar wahân cadwyni E. colie A a B. Mae cost y cynnyrch wedi gostwng yn sylweddol, mae'r inswlin sy'n deillio ohono yn union yr un fath â dynol. Er 1980, bu adroddiadau yn y wasg am glonio'r genyn proinsulin, rhagflaenydd hormonau sy'n dod yn aeddfed gyda phroteolysis cyfyngedig.

Mae technoleg amgáu hefyd yn cael ei chymhwyso i drin diabetes: mae celloedd pancreatig mewn capsiwl, a gyflwynir unwaith i gorff y claf, yn cynhyrchu inswlin yn ystod y flwyddyn.

Mae Geneteg Integredig wedi lansio hormonau ysgogol a luteinizing sy'n ysgogi'r ffoligl. Mae'r peptidau hyn yn cynnwys dau is-uned. Ar yr agenda mae synthesis diwydiannol hormonau oligopeptid y system nerfol - enkeffalinau, wedi'u hadeiladu o 5 gweddillion asid amino, ac endorffinau, analogau morffin.

Pan gânt eu defnyddio'n rhesymol, mae'r peptidau hyn yn lleddfu poen, yn creu hwyliau da, yn cynyddu gallu gweithio, yn canolbwyntio sylw, yn gwella cof, ac yn rhoi cwsg a bod yn effro.

Enghraifft o gymhwyso dulliau peirianneg genetig yn llwyddiannus yw synthesis p-endorphin gan ddefnyddio'r dechnoleg protein hybrid a ddisgrifir uchod ar gyfer hormon peptid arall, somatostatin.

Dulliau ar gyfer cynhyrchu inswlin dynol:

Yn hanesyddol, y ffordd gyntaf o gael inswlin at ddibenion therapiwtig yw ynysu analogau o'r hormon hwn o ffynonellau naturiol (ynysoedd pancreas gwartheg a moch).

Yn 20au’r ganrif ddiwethaf, darganfuwyd bod inswlinau buchol a phorc (sydd agosaf at inswlin dynol mewn strwythur a dilyniant asid amino) yn arddangos gweithgaredd yn y corff dynol sy’n debyg i inswlin dynol. Ar ôl hyn, defnyddiwyd inswlin tarw neu foch am amser hir i drin cleifion â diabetes math I.

Fodd bynnag, ar ôl ychydig dangoswyd bod gwrthgyrff i inswlin buchol a mochyn yn dechrau cronni yn y corff dynol mewn rhai achosion, a thrwy hynny yn negyddu eu heffaith.

Ar y llaw arall, un o fanteision y dull hwn o gael inswlin yw argaeledd deunyddiau crai (gellir cael llawer o inswlin buchol a phorc yn hawdd), a chwaraeodd ran bendant yn natblygiad y dull cyntaf ar gyfer cynhyrchu inswlin dynol.Gelwir y dull hwn yn lled-synthetig.

Yn y dull hwn o gynhyrchu inswlin dynol, defnyddiwyd inswlin moch fel porthiant. Cliriwyd octapeptid C-terminal y gadwyn B o inswlin mochyn wedi'i buro, ac ar ôl hynny syntheseiddiwyd octapeptid C-terminal inswlin dynol.

Yna roedd ynghlwm yn gemegol, tynnwyd y grwpiau amddiffynnol a phuredigwyd yr inswlin o ganlyniad. Wrth brofi'r dull hwn o gael inswlin, dangoswyd hunaniaeth gyflawn yr hormon a gafwyd i inswlin dynol.

Prif anfantais y dull hwn yw cost uchel yr inswlin sy'n deillio ohono (hyd yn oed nawr, mae synthesis cemegol octapeptid yn bleser drud, yn enwedig ar raddfa ddiwydiannol).

Ar hyn o bryd, ceir inswlin dynol yn bennaf mewn dwy ffordd: trwy addasu inswlin mochyn trwy'r dull synthetig-ensymatig a thrwy'r dull peirianneg genetig.

Yn yr achos cyntaf, mae'r dull yn seiliedig ar y ffaith bod inswlin moch yn wahanol i inswlin dynol mewn un amnewidiad yn C-derfynfa cadwyn Ala30Thr B.

Gwneir disodli alanîn â threonin trwy holltiad alanîn wedi'i gataleiddio gan ensymau ac ychwanegu gweddillion threonin a ddiogelir gan y grŵp carboxy yn ei le, sy'n bresennol mewn gormodedd mawr yn y gymysgedd adweithio. Ar ôl holltiad y grŵp amddiffynnol O-tert-butyl, ceir inswlin dynol.

Inswlin oedd y protein cyntaf a gafwyd at ddibenion masnachol gan ddefnyddio technoleg DNA ailgyfunol. Mae dau brif ddull ar gyfer cynhyrchu inswlin dynol wedi'i beiriannu'n enetig.

Yn yr achos cyntaf, ceir gwahanol fathau o wahanol gynhyrchwyr ar gyfer y ddwy gadwyn ac yna plygu'r moleciwl (ffurfio pontydd disulfide) a gwahanu isofformau.

Yn yr ail, cynhyrchu ar ffurf rhagflaenydd (proinsulin) ac yna treuliad ensymatig gyda trypsin a carboxypeptidase B i ffurf weithredol yr hormon.

Ar hyn o bryd, mae'n well o lawer cael inswlin ar ffurf rhagflaenydd, sy'n sicrhau bod pontydd disulfide yn cau'n gywir (yn achos paratoi cadwyni ar wahân, mae cylchoedd dadnatureiddio yn olynol, gwahanu isofformau ac ail-daliad).

Gyda'r ddau ddull, mae'n bosibl cael y cydrannau cychwynnol (cadwyni A- a B neu proinsulin) yn unigol, ac fel rhan o broteinau hybrid. Yn ogystal â'r cadwyni A a B neu'r proinsulin, gall proteinau hybrid gynnwys:

1) protein cludwr - darparu cludo protein hybrid i ofod periplasmig cyfrwng cell neu ddiwylliant,

2) cydran affinedd - gan hwyluso ynysu'r protein hybrid yn sylweddol.

At hynny, gall y ddwy gydran hyn fod yn bresennol ar yr un pryd yng nghyfansoddiad y protein hybrid. Yn ogystal, wrth greu proteinau hybrid, gellir defnyddio egwyddor amlddimensiwn (hynny yw, mae sawl copi o'r polypeptid targed yn bresennol yn y protein hybrid), a all gynyddu cynnyrch y cynnyrch targed yn sylweddol.

Mynegiant proinsulin mewn celloedd E. coli ..

Defnyddiwyd straen JM 109 N1864 gyda dilyniant niwcleotid yn mynegi protein ymasiad, sy'n cynnwys proinsulin llinol a darn o brotein A o Staphylococcus aureus ynghlwm wrth ei N-derfynfa trwy'r gweddillion methionine.

Mae tyfu biomas dirlawn celloedd y straen ailgyfunol yn darparu dechrau cynhyrchu protein hybrid, y mae ei ynysu a'i drawsnewid dilyniannol mewn tiwb yn arwain at inswlin.

Derbyniodd grŵp arall o ymchwilwyr brotein ailgyfunol yn cynnwys proinsulin dynol a chynffon poly-histidine ynghlwm wrtho trwy weddillion methionine yn system mynegiant bacteriol ymasiad. Cafodd ei ynysu gan ddefnyddio cromatograffeg chelad ar golofnau Ni-agarose gan gyrff cynhwysiant a'i dreulio â bromid cyanogen.

Dangosodd mapio a dadansoddiad sbectrometreg màs o'r proinsulin a gafwyd wedi'i buro gan gromatograffaeth cyfnewid ïon ar resin cyfnewid anion a RP (cam gwrthdroi) HPLC (cromatograffeg hylif perfformiad uchel) bresenoldeb pontydd disulfide sy'n cyfateb i bontydd disulfide proinsulin dynol brodorol. Adroddir hefyd ar ddatblygiad dull newydd, gwell ar gyfer cynhyrchu inswlin dynol trwy beirianneg genetig mewn celloedd procaryotig. Canfu'r awduron fod yr inswlin sy'n deillio o hyn yn ei strwythur a'i weithgaredd fiolegol yn union yr un fath â'r hormon sydd wedi'i ynysu o'r pancreas.

Yn ddiweddar, rhoddwyd sylw manwl i symleiddio'r weithdrefn ar gyfer cynhyrchu inswlin ailgyfunol trwy beirianneg genetig. Felly, cafwyd protein ymasiad yn cynnwys peptid arweinydd interleukin ynghlwm wrth N-derfynfa proinsulin trwy'r gweddillion lysin. Mynegwyd a lleolwyd y protein yn effeithlon mewn cyrff cynhwysiant.

Ar ôl ynysu, treuliwyd y protein â trypsin i gynhyrchu inswlin a C-peptid. Gweithredodd grŵp arall o ymchwilwyr mewn ffordd debyg. Protein ymasiad sy'n cynnwys proinsulin a dau barth synthetig o staphylococcus Lleolwyd IgG sy'n rhwymo protein mewn cyrff cynhwysiant, ond roedd ganddo lefel mynegiant uwch.

Cafodd y protein ei ynysu gan gromatograffaeth affinedd IgG a'i dreulio â trypsin a carboxypeptidase B. Cafodd yr inswlin a'r C-peptid o ganlyniad eu puro gan RP HPLC. Wrth greu strwythurau wedi'u hasio, mae cymhareb màs y protein cludwr a'r polypeptid targed yn arwyddocaol iawn.

Disgrifir adeiladu cystrawennau ymasiad lle defnyddir protein rhwymo serwm albwmin dynol fel polypeptid cludwr. Roedd un, tri a saith C-peptid ynghlwm wrtho.

Cysylltwyd C-peptidau ar sail cynffon pen gan ddefnyddio gofodwyr asid amino sy'n cario safle cyfyngiad Sfi I a dau weddillion arginine ar ddechrau ac ar ddiwedd y spacer ar gyfer hollti protein wedi hynny â trypsin. Dangosodd HPLC o'r cynhyrchion holltiad fod holltiad y C-peptid yn feintiol, ac mae hyn yn caniatáu defnyddio genynnau synthetig amlimerig i gael polypeptidau targed ar raddfa ddiwydiannol.

Cael proinsulin mutant, a oedd yn cynnwys amnewid Arg32Tyr. Pan gafodd y protein hwn ei gyd-glirio â trypsin a carboxypeptidase B, ffurfiwyd inswlin brodorol a C-peptid sy'n cynnwys y gweddillion tyrosine. Defnyddir yr olaf, ar ôl labelu 125I, yn weithredol mewn radioimmunoassay.

Rhaid i inswlin a fwriadwyd ar gyfer cynhyrchu cyffuriau fod o burdeb uchel. Felly, mae angen rheolaeth hynod effeithiol ar burdeb y cynhyrchion a geir ar bob cam o'r cynhyrchiad. Yn flaenorol, defnyddiwyd RPLC ac IO (cyfnewid ïon) HPLC i nodweddu proinsulin-S-sulfonate, proinsulin, cadwyni A- a B unigol, a'u S-sulfonadau.

Rhoddir sylw arbennig hefyd i'r deilliad inswlin fflwroleuol. Yn y gwaith, ymchwiliodd yr awduron i gymhwysedd ac addysgiadol dulliau cromatograffig wrth ddadansoddi cynhyrchion ar bob cam o gynhyrchu inswlin dynol a llunio amserlen o weithrediadau cromatograffig i wahanu a nodweddu'r cynhyrchion sy'n deillio o hyn yn effeithiol.

Yn ogystal, mae dulliau'n cael eu datblygu i awtomeiddio a chyflymu'r prosesau ar gyfer pennu purdeb a maint inswlin.

Adroddir ar astudiaethau ar y posibilrwydd o ddefnyddio cromatograffeg hylif RP gyda chanfod electrocemegol i bennu inswlin, a datblygwyd methodoleg ar gyfer canfod inswlin sydd wedi'i ynysu o ynys Langerhans trwy gromatograffaeth immunoaffinity â chanfod sbectrometreg.

Yn y gwaith, ymchwiliwyd i'r posibilrwydd o ddefnyddio micro-benderfyniad cyflym ar inswlin gan ddefnyddio electrofforesis capilaidd gyda chanfod laser-fflwroleuedd.Perfformir y dadansoddiad trwy ychwanegu at y sampl swm hysbys o inswlin wedi'i labelu â phenylisothiocyanate (FITC) a darn Fab o wrthgyrff inswlin monoclonaidd. Mae inswlinau wedi'u labelu a rheolaidd yn ymateb yn gystadleuol i gyfadeilad Fab. Mae inswlin wedi'i labelu gan FITZ a'i gymhleth â Fab wedi'u gwahanu mewn 30 eiliad.

Inswlin peirianneg enetig

Mae'r cwestiwn o ba inswlin yn cael ei wneud o ddiddordeb nid yn unig i feddygon a fferyllwyr, ond hefyd i gleifion â diabetes mellitus, yn ogystal â'u perthnasau a'u ffrindiau.

Heddiw, gellir cael yr hormon unigryw ac mor bwysig hwn ar gyfer iechyd pobl o amrywiol ddeunyddiau crai gan ddefnyddio technolegau sydd wedi'u datblygu'n arbennig a'u profi'n ofalus. Yn dibynnu ar y dull paratoi, gwahaniaethir y mathau canlynol o inswlin:

• Porc neu fuch, a elwir hefyd yn gynnyrch anifeiliaid
• Mochyn biosynthetig wedi'i addasu wedi'i addasu
• Peirianneg enetig neu ailgyfuno
• Wedi'i Addasu'n Genetig
• Synthetig

Mae inswlin porc wedi'i ddefnyddio hiraf ar gyfer diabetes. Dechreuwyd ei gymhwyso yn ôl yn 20au’r ganrif ddiwethaf.

Dylid nodi mai porc neu anifail oedd yr unig gyffur tan 80au’r ganrif ddiwethaf. Er mwyn ei gael, defnyddir meinwe pancreas anifeiliaid.

Fodd bynnag, prin y gellir galw'r dull hwn yn optimaidd neu'n syml: nid yw gweithio gyda deunyddiau crai biolegol bob amser yn gyfleus, ac nid yw'r deunydd crai ei hun yn ddigon.

Yn ogystal, nid yw cyfansoddiad inswlin mochyn yn cyd-fynd yn llwyr â chyfansoddiad yr hormon a gynhyrchir gan berson iach: mae gweddillion asid amino amrywiol yn bresennol yn eu strwythur. Dylid nodi bod gan yr hormonau a gynhyrchir gan pancreas gwartheg nifer fwy fyth o wahaniaethau, na ellir eu galw'n ffenomen gadarnhaol.

Mewn paratoad o'r fath, yn ychwanegol at sylwedd aml-gydran pur, mae'r proinsulin fel y'i gelwir yn ddieithriad wedi'i gynnwys, sylwedd na ellir ei wahanu gan ddefnyddio dulliau puro modern. Ef sy'n aml yn dod yn ffynhonnell adweithiau alergaidd, sy'n arbennig o beryglus i blant a'r henoed.

Unwaith eto, mae fferyllfeydd eisiau cyfnewid am ddiabetig. Mae yna gyffur Ewropeaidd modern synhwyrol, ond maen nhw'n cadw'n dawel yn ei gylch. Hynny.

Am y rheswm hwn, mae gwyddonwyr ledled y byd wedi bod â diddordeb ers amser maith mewn dod â chyfansoddiad yr hormon a gynhyrchir gan anifeiliaid i gydymffurfio'n llawn â hormonau pancreatig person iach. Datblygiad arloesol go iawn ym maes ffarmacoleg a thriniaeth diabetes oedd cynhyrchu cyffur lled-synthetig a gafwyd trwy ddisodli'r alanîn asid amino mewn paratoad anifail â threonin.

Ar yr un pryd, mae dull lled-synthetig ar gyfer cynhyrchu'r hormon yn seiliedig ar ddefnyddio paratoadau anifeiliaid. Hynny yw, maent yn syml yn cael eu haddasu ac yn dod yn union yr un fath â hormonau a gynhyrchir gan fodau dynol. Ymhlith eu manteision mae cydnawsedd â'r corff dynol ac absenoldeb adweithiau alergaidd.

Mae anfanteision y dull hwn yn cynnwys prinder deunyddiau crai ac anhawster gweithio gyda deunyddiau biolegol, yn ogystal â chost uchel y dechnoleg ei hun a'r cyffur sy'n deillio o hynny.

Yn hyn o beth, y cyffur gorau ar gyfer trin diabetes yw inswlin ailgyfunol a geir trwy beirianneg genetig.

Gyda llaw, fe'i gelwir yn aml yn inswlin wedi'i beiriannu'n enetig, ac felly'n nodi'r dull o'i gael, a gelwir y cynnyrch sy'n deillio o hyn yn inswlin dynol, a thrwy hynny bwysleisio ei hunaniaeth absoliwt i'r hormonau a gynhyrchir gan pancreas person iach.

Ymhlith manteision inswlin peirianneg genetig, dylai un hefyd nodi ei raddau uchel o burdeb a diffyg proinsulin, yn ogystal â'r ffaith nad yw'n achosi unrhyw adweithiau alergaidd ac nad oes ganddo wrtharwyddion.

Mae'r cwestiwn cyffredin yn ddealladwy: o beth yn union y mae inswlin ailgyfunol yn cael ei wneud? Mae'n ymddangos bod yr hormon hwn yn cael ei gynhyrchu gan straenau burum, yn ogystal ag Escherichia coli, wedi'i roi mewn cyfrwng maetholion arbennig. Ar ben hynny, mae swm y sylwedd a gafwyd mor fawr fel ei bod yn bosibl rhoi'r gorau i'r defnydd o gyffuriau a geir o organau anifeiliaid yn llwyr.

Wrth gwrs, nid yw hyn yn ymwneud ag E. coli syml, ond yn hytrach wedi'i addasu gan enynnau ac yn gallu cynhyrchu inswlin genetig dynol hydawdd, y mae ei gyfansoddiad a'i briodweddau yn union yr un fath â'r hormon a gynhyrchir gan gelloedd pancreas person iach.

Manteision inswlin peirianneg genetig yw nid yn unig ei debygrwydd llwyr i hormon dynol, ond hefyd pa mor hawdd yw ei baratoi, swm digonol o ddeunyddiau crai a chost fforddiadwy.

Mae gwyddonwyr ledled y byd yn galw bod cynhyrchu inswlin ailgyfunol yn ddatblygiad gwirioneddol wrth drin diabetes. Mae arwyddocâd y darganfyddiad hwn mor fawr a phwysig fel ei bod yn anodd ei oramcangyfrif.

Mae'n ddigon syml nodi heddiw bod bron i 95% o'r angen am yr hormon hwn yn cael ei ddiwallu gyda chymorth inswlin wedi'i beiriannu'n enetig.

Ar yr un pryd, cafodd miloedd o bobl a oedd ag alergedd i gyffuriau yn flaenorol gyfle am fywyd normal.

Cefais ddiabetes am 31 mlynedd. Mae bellach yn iach. Ond, mae'r capsiwlau hyn yn anhygyrch i bobl gyffredin, nid ydyn nhw am werthu fferyllfeydd, nid yw'n broffidiol iddyn nhw.

Sut mae inswlin peirianneg ddynol yn gweithio

Wrth drin diabetes mellitus math 1, defnyddir inswlin peirianneg genetig dynol dau gam. Mewn fferyllfeydd, caiff ei werthu ar ffurf toddiant ac mae ganddo'r marc “Caru”. Gellir trin yr ail fath o glefyd gyda chyffur o'r fath os nad yw'r meddyginiaethau rhagnodedig yn addas ar gyfer diabetig.

Defnyddir inswlin wedi'i beiriannu'n enetig hefyd os oes gan berson goma diabetig. Mae meddygon yn aml yn rhagnodi pigiadau i ferched beichiog sydd wedi'u diagnosio â diabetes mellitus pan nad yw pils gostwng siwgr a diet therapiwtig yn helpu.

Yn gyffredinol, defnyddir inswlinau neu GMOs a beiriannwyd yn enetig yn ystod genedigaeth, pan fyddant yn cael llawdriniaeth, neu os yw'r diabetig wedi'i anafu'n ddifrifol. Mae'r cyffur yn caniatáu ichi newid yn ddiogel i ddefnyddio hormonau sy'n gweithredu'n gyflym.

1. Cyn defnyddio peirianneg genetig ddynol biphasig inswlin, mae angen gwneud prawf a darganfod a yw'r feddyginiaeth hon yn addas i'r claf. Os yw diabetig yn datgelu hypoglycemia, ni argymhellir defnyddio'r cyffur.
2. Cynllun gweithredu'r datrysiad yw bod inswlin wedi'i beiriannu'n enetig yn rhyngweithio â'r celloedd, sy'n arwain at ffurfio cyfadeiladau. Pan fydd celloedd yn mynd i mewn i'r cyfadeiladau hyn, maent yn cael eu hysgogi ac yn dechrau gweithio'n fwy gweithredol. O ganlyniad, cynhyrchir mwy o ensymau.
3. Yn y broses, mae glwcos yn cael ei amsugno'n gyflymach, mae carbohydradau sy'n mynd i mewn i'r corff yn cael eu prosesu'n weithredol. Felly, mae'r afu yn cynhyrchu glwcos yn hirach, a gellir amsugno proteinau yn gynt o lawer.

Mae egwyddor gweithredu'r cyffur yn dibynnu ar y dos, y math o inswlin, y dewis o safle'r pigiad. Dim ond ar ôl cytuno â'r meddyg sy'n mynychu y dylid gwneud unrhyw weithdrefn. Gwneir y pigiadau cyntaf o dan oruchwyliaeth feddygol.

Argymhellion ar gyfer defnyddio'r cyffur

Mae gan beirianneg genetig ddynol debyg neu inswlin biphasig enwau masnach gwahanol. Hefyd, gall hormonau amrywio o ran hyd y gweithredu, y dull o baratoi'r datrysiad. Enwir cynhyrchion yn seiliedig ar y math o inswlin.

Mae inswlinau wedi'u peiriannu'n enetig yn rhan o feddyginiaethau fel Humudar, Vozulim, Actrapid. Insuran, Gensulin. Nid yw hon yn rhestr gyflawn o gyffuriau o'r fath, mae eu nifer yn eithaf mawr.

Mae'r holl feddyginiaethau uchod yn amrywio o ran dod i gysylltiad â'r corff.Gall GMOs bara sawl awr neu fod yn egnïol am ddiwrnodau cyfan.

Mae cyffuriau cyfuniad dau gam yn cynnwys cyffuriau sy'n cynnwys rhai cydrannau sy'n newid cyfnod yr amlygiad i'r cyffur.

• Gwerthir cyffuriau o'r fath ar ffurf cymysgeddau, gan gynnwys hormonau a geir yn enetig.
• Mae'r cronfeydd hyn yn cynnwys Mikstard, Insuman, Gansulin, Gensulin.
• Defnyddir cyffuriau ddwywaith y dydd, hanner awr cyn pryd bwyd. Dylid cadw at system o'r fath yn llym, gan fod yr hormon yn uniongyrchol gysylltiedig â'r cyfnod y cymerir bwyd.

Trwy gynhyrchu genynnau inswlin dynol, ceir paratoad sydd ag amser datguddio ar gyfartaledd.

1. Daw'r datrysiad i rym o fewn 60 munud, ond arsylwir eiliad y gweithgaredd uchaf chwech i saith awr ar ôl y pigiad.
2. Mae'r feddyginiaeth yn cael ei thynnu o'r corff yn llwyr ar ôl 12 awr.
3. Mae cyffuriau o'r fath yn cynnwys Insuran, Insuman, Protafan, Rinsulin, Biosulin.

Mae yna GMOs hefyd gyda chyfnod byr o ddod i gysylltiad â'r corff. Mae'r rhain yn cynnwys meddyginiaethau Inswlin Actrapid, Gansulin, Humulin, Insuran, Rinsulin, Bioinsulin. Mae gan inswlinau o'r fath gyfnod gweithredol ar ôl dwy i dair awr, a gellir gweld yr arwyddion cyntaf o weithred y cyffur o fewn hanner awr ar ôl y pigiad.

Cyn rhoi inswlin, mae angen archwilio GMOs am ​​dryloywder ac absenoldeb sylweddau tramor yn yr hylif. Os canfyddir sylweddau tramor yn y feddyginiaeth, mae cymylogrwydd neu wlybaniaeth yn digwydd, rhaid taflu'r ffiol - nid yw'r feddyginiaeth yn addas i'w defnyddio.

Rhaid i'r inswlin a ddefnyddir fod ar dymheredd yr ystafell. Rhaid addasu dos yr hormon os oes gan y diabetig glefyd heintus, camweithrediad y thyroid, clefyd Addison, hypopituitariaeth, a chlefyd cronig yr arennau.

Mae ymosodiadau o hypoglycemia yn bosibl gyda gorddos o'r cyffur, yn achos trosglwyddo i fath newydd o inswlin, oherwydd sgipio prydau bwyd neu or-ffrwyno corfforol. Hefyd gall y nam fod yn glefydau sy'n lleihau'r angen am hormon - gradd ddifrifol o glefyd yr arennau, clefyd yr afu, chwarren thyroid is, cortecs adrenal, a chwarren bitwidol.

1. Mae gostyngiad sydyn mewn siwgr gwaed yn bosibl gyda newid yn ardal y pigiad. Felly, mae angen newid o un math o inswlin yn rhesymol a dim ond ar ôl cytuno â'r meddyg sy'n mynychu.
2. Os yw diabetig yn defnyddio inswlin dros dro, weithiau mae cyfaint y meinwe adipose yn lleihau ar safle'r pigiad neu, i'r gwrthwyneb, yn cynyddu. Er mwyn atal hyn, rhaid gwneud y pigiad mewn gwahanol leoedd.

Rhaid i ferched beichiog fod yn ymwybodol y gall gofynion inswlin amrywio yn ystod gwahanol gyfnodau beichiogrwydd. I wneud hyn, mae angen i chi gynnal prawf siwgr gwaed dyddiol gyda glucometer.

Disgrifir gweithred inswlin ar y corff dynol yn fanwl yn y fideo yn yr erthygl hon.

1. Strwythur a swyddogaethau inswlin 5

1.1. Strwythur y moleciwl inswlin 5

1.2. Arwyddocâd biolegol inswlin 7

1.3. Biosynthesis Inswlin 8

2. synthesis inswlin peirianneg enetig 10

2.1. Defnyddio dulliau peirianneg genetig ar gyfer synthesis cyffuriau 10

2.2. Dulliau Peirianneg Genetig 11

2.3. Cynhyrchu inswlin peirianneg enetig 14

Casgliad 18

Symptomau gorddos

Wrth ddefnyddio inswlin, mae'n bwysig dilyn argymhellion y meddyg ac arsylwi union ddos ​​y cyffur rhagnodedig.

Mewn achos o ddiffyg cydymffurfio â'r rheolau a gorddos, mae'r diabetig yn dechrau profi cur pen difrifol, crampiau, newyn, chwysu, cyfradd curiad y galon uwch, curiad y galon, gorweithio ac anniddigrwydd. Gellir hefyd arsylwi oerfel yn y corff cyfan a chrynu.

Mae symptomau o'r fath yn debyg iawn i arwyddion o ostyngiad mewn glwcos yn y gwaed.Gyda chyfnod ysgafn o symptomau, gall y diabetig ddatrys y broblem yn annibynnol a gwella'r cyflwr. I wneud hyn, bwyta candy neu unrhyw gynnyrch melys arall sy'n cynnwys siwgr.

• Os bydd coma diabetig yn digwydd, maent yn defnyddio toddiant dextrose, rhoddir y cyffur yn fewnwythiennol nes bod y person yn ymwybodol. Ar yr arwyddion amheus cyntaf, mae angen galw ambiwlans, a fydd yn gallu dod â'r claf yn fyw trwy ddulliau brys.
• Fel sgîl-effeithiau ar ôl defnyddio GMOs, mae gan berson frechau ar y croen ar ffurf wrticaria, mae rhannau o'r corff yn chwyddo, mae pwysedd gwaed yn gostwng yn sydyn, gall cosi a diffyg anadl ddigwydd. Mae hwn yn adwaith alergaidd i gyffur, a all ddiflannu ar ei ben ei hun heb ymyrraeth feddygol. Os bydd y sefyllfa'n parhau, dylech ymgynghori â'ch meddyg.
• Yn ystod dyddiau cyntaf paratoi inswlin, mae pobl ddiabetig yn aml yn dadhydradu'r corff, mae person yn profi diffyg hylif, mae archwaeth yn gwaethygu, mae chwydd ar y breichiau a'r coesau'n ymddangos, a theimlir cysgadrwydd cyson. Mae symptomau o'r fath fel arfer yn diflannu yn gyflym ac nid ydynt yn digwydd eto.

Adolygiadau a sylwadau

Mae gen i ddiabetes math 2 - heb fod yn ddibynnol ar inswlin. Cynghorodd ffrind ostwng siwgr gwaed gyda DiabeNot. Fe wnes i archebu trwy'r Rhyngrwyd. Dechreuwyd y derbyniad.

Rwy'n dilyn diet nad yw'n gaeth, bob bore dechreuais gerdded 2-3 cilomedr ar droed. Dros y pythefnos diwethaf, sylwaf ar ostyngiad llyfn mewn siwgr ar y mesurydd yn y bore cyn brecwast o 9.3 i 7.1, a hyd yn oed i 6 ddoe.

1! Rwy'n parhau â'r cwrs ataliol. Byddaf yn dad-danysgrifio am lwyddiannau.

Margarita Pavlovna, rwyf hefyd yn eistedd ar Diabenot nawr. SD 2. Nid oes gennyf amser mewn gwirionedd ar gyfer diet a theithiau cerdded, ond nid wyf yn cam-drin losin a charbohydradau, rwy'n credu XE, ond oherwydd oedran, mae siwgr yn dal i fod yn uchel.

Nid yw'r canlyniadau cystal â'ch un chi, ond am 7.0 nid yw siwgr yn dod allan am wythnos. Pa glucometer ydych chi'n mesur siwgr ag ef? Ydy e'n dangos plasma neu waed cyfan i chi? Rwyf am gymharu'r canlyniadau o gymryd y cyffur.

Diolch yn fawr iawn am swydd mor addysgiadol.

Cynhyrchu inswlin peirianneg enetig

Er mwyn gwneud i berson deimlo'n iach, mae angen i chi fonitro lefel yr inswlin yn y corff. Dylai'r hormon hwn fod yn ddigon fel nad yw glwcos yn cronni yn y gwaed. Fel arall, rhag ofn anhwylderau metabolaidd, bydd y meddyg yn diagnosio diabetes.

Therapi ar gyfer cam datblygedig diabetes mellitus yw ailgyflenwi'r crynodiad inswlin sydd ar goll, na all y corff ei gynhyrchu'n naturiol. Ar gyfer hyn, defnyddir inswlin hydawdd, sy'n debyg i beirianneg enetig ddynol. Mae'r pancreas yn gyfrifol am gynhyrchu hormon o'r fath.

Ar gyfer cynhyrchu inswlin, nid yn unig y dechnoleg ar gyfer cynhyrchu hormon naturiol, mae gweithgynhyrchwyr hefyd yn defnyddio inswlin wedi'i addasu a gafwyd yn artiffisial. Nodir bod y cyffur sydd wedi'i farcio "solubilis" yn hydawdd.

Mathau o gyffuriau

Mae gan beirianneg genetig ddynol debyg neu inswlin biphasig enwau masnach gwahanol. Hefyd, gall hormonau amrywio o ran hyd y gweithredu, y dull o baratoi'r datrysiad. Enwir cynhyrchion yn seiliedig ar y math o inswlin.

Mae inswlinau wedi'u peiriannu'n enetig yn rhan o feddyginiaethau fel Humudar, Vozulim, Actrapid. Insuran, Gensulin. Nid yw hon yn rhestr gyflawn o gyffuriau o'r fath, mae eu nifer yn eithaf mawr.

Mae'r holl feddyginiaethau uchod yn amrywio o ran dod i gysylltiad â'r corff. Gall GMOs bara sawl awr neu fod yn egnïol am ddiwrnodau cyfan.

Mae cyffuriau cyfuniad dau gam yn cynnwys cyffuriau sy'n cynnwys rhai cydrannau sy'n newid cyfnod yr amlygiad i'r cyffur.

• Gwerthir cyffuriau o'r fath ar ffurf cymysgeddau, gan gynnwys hormonau a geir yn enetig.
• Mae'r cronfeydd hyn yn cynnwys Mikstard, Insuman, Gansulin, Gensulin.
• Defnyddir cyffuriau ddwywaith y dydd, hanner awr cyn pryd bwyd. Dylid cadw at system o'r fath yn llym, gan fod yr hormon yn uniongyrchol gysylltiedig â'r cyfnod y cymerir bwyd.

Trwy gynhyrchu genynnau inswlin dynol, ceir paratoad sydd ag amser datguddio ar gyfartaledd.

1. Daw'r datrysiad i rym o fewn 60 munud, ond arsylwir eiliad y gweithgaredd uchaf chwech i saith awr ar ôl y pigiad.
2. Mae'r feddyginiaeth yn cael ei thynnu o'r corff yn llwyr ar ôl 12 awr.
3. Mae cyffuriau o'r fath yn cynnwys Insuran, Insuman, Protafan, Rinsulin, Biosulin.

Mae yna GMOs hefyd gyda chyfnod byr o ddod i gysylltiad â'r corff. Mae'r rhain yn cynnwys meddyginiaethau Inswlin Actrapid, Gansulin, Humulin, Insuran, Rinsulin, Bioinsulin. Mae gan inswlinau o'r fath gyfnod gweithredol ar ôl dwy i dair awr, a gellir gweld yr arwyddion cyntaf o weithred y cyffur o fewn hanner awr ar ôl y pigiad.

Mae cyffuriau o'r fath yn cael eu hysgarthu yn llwyr ar ôl chwe awr.

Defnyddio dynol sy'n hydawdd mewn inswlin wedi'i beiriannu'n enetig ar gyfer diabetes

Mae inswlin a beiriannwyd yn enetig ddynol yn ddisodli hormon cyffredin ar gyfer inswlin sy'n cynhyrchu'r pancreas.

Defnyddir nid yn unig hormon dynol a addaswyd yn enetig ar gyfer synthesis, ond hefyd sylwedd a grëwyd yn synthetig. Opsiwn adnabyddus arall ar gyfer creu'r cyffur yw'r defnydd o inswlin moch wedi'i addasu, oherwydd

yn ei gyfansoddiad a'i swyddogaethau, mae'n agosaf at y dynol.

Amserlen cynhyrchu inswlin peirianneg enetig.

Arwyddion a gwrtharwyddion

Gellir defnyddio inswlin wedi'i beiriannu'n enetig ar gyfer diabetes mellitus math 1 a diabetes math 2, pan welir adwaith cyson i gyffuriau geneuol â natur hypoglycemig.

Gellir ei ddefnyddio pan fydd y claf mewn rhai mathau o goma. Os yw menyw feichiog yn dechrau cael diabetes, yna caniateir defnyddio inswlin peirianneg, ond dim ond os nad yw'r diet yn helpu i effeithio ar lefelau glwcos. Argymhellir ei ddefnyddio mewn achosion o haint â heintiau lle gellir arsylwi hyperthermia.

Mae paratoadau genynnau yn llwyddiannus yn eu defnydd yn ystod genedigaeth, llawdriniaethau, anafiadau, anhwylderau metabolaidd ac yn achos trosglwyddiad graddol i inswlin gyda gweithred hir.

Gwaherddir defnyddio paratoadau genynnau yn disodli'r hormon â gorsensitifrwydd i rai elfennau o'r cyffur a gyda hypoglycemia.

Gweithredu ffarmacolegol cyffuriau

Mae cyffuriau o'r math hwn yn adweithio â derbynyddion penodol pilenni celloedd, gan ffurfio cyfadeiladau gyda nhw. Pan fydd yn mynd i mewn i'r celloedd, mae cymhleth y cyffur yn effeithio ar y gwaith, gan ei ysgogi i fod yn fwy egnïol ac i gynhyrchu ensymau ychwanegol.

Mae'r lefel glwcos yn cwympo oherwydd ei fod yn cael ei brosesu'n gyflymach gan gelloedd. Ar ôl hynny, mae'r broses o lipogenesis, cynhyrchu protein yn cyflymu ac mae cyflymder yr afu wrth ffurfio glwcos yn cael ei leihau.

Bydd hyd y cyffur yn dibynnu ar safle'r pigiad, y math o gyffur, dos ac ymateb unigol y corff dynol. Dim ond meddyg all osod dosau a rhagnodi rhai cyffuriau yn y grŵp hwn. Yn y cyfnod cychwynnol o gymryd cyffuriau, mae'r claf yn cael ei fonitro'n agos gan feddygon i ddarganfod a yw'r cyffur yn cael ei wrthod.

Enghreifftiau o Feddyginiaethau Inswlin Dynol a Beiriannwyd yn Enetig

Mae inswlin a beiriannwyd yn enetig dynol wedi'i gynnwys mewn cyffuriau mor adnabyddus ag Insuran, Insuman, Vozulim, Penfill, Biosulin, Gensulin, Actrapid, Rinsulin, Humulin, Humudar, Rosinsulin a rhai eraill.

Mae yna wahanol fathau o inswlin.Mae un o'r dosbarthiadau yn ymwneud â hyd y cyffur. Yn ôl iddi, gall inswlin hydawdd gael gweithred fer a hir. Mae cyffuriau cyfun (inswlin biphasig), sy'n cynnwys sylwedd o weithredu cyflym ac estynedig.

Gelwir y math hwn o feddyginiaeth yn gymysgedd. Yn eu plith, mae yna rai sy'n cael eu creu gyda newid yn yr hormon dynol. Inswlin dau gam yw Mikstard, Gansulin, Insuman, Humulin a Gensulin. Mae angen eu defnyddio ddwywaith y dydd, hanner awr cyn prydau bwyd.

Mae hyn oherwydd y ffaith bod gan inswlin dau gam sylwedd dros dro, y mae ei gymeriant yn dibynnu ar y diet.

Mae analog peirianneg o hormon dynol ymhlith cyffuriau sydd â hyd cyfartalog. Mae'r inswlin hydawdd hwn yn dechrau gweithredu ar ôl awr, ac mae brig ei weithgaredd yn digwydd ar ôl 7 awr. Ar ôl 12 awr, mae'n cael ei arddangos. Cyffur dynol y grŵp hwn sydd wedi'i beiriannu'n enetig yw Insuman, Protafan, Humulin, Rinsulin, Biosulin, Gensulin, Gansulin, Insuran.

Mae cyffur dynol wedi'i beiriannu'n enetig ymhlith y grŵp gyda gweithred fer. Er enghraifft, mae'r rhain yn cynnwys Gansulin, Insuran, Humulin, Rinsulin, Gensulin, Bioinsulin ac Actrapid. Mae inswlin hydawdd o'r fath yn dechrau gweithredu mewn hanner awr, ac mae ei weithgaredd yn cyrraedd ei lefel uchaf mewn cwpl o oriau. Mae cyffuriau o'r fath yn cael eu hysgarthu am 6 awr.

Mewn achos o orddos o gyffuriau ag inswlin a beiriannwyd yn enetig, gall gwendid, cysgadrwydd, blinder, anniddigrwydd, oerfel, ysgarthiad cynyddol o chwys oer, crynu, pallor, crychguriadau, cur pen, crampiau a newyn. Mae'r rhain i gyd yn symptomau hypoglycemia.

Os yw'r afiechyd hwn newydd ddechrau datblygu a'i fod yn ei gamau cynharach, haws, yna gallwch chi gael gwared ar yr holl symptomau eich hun. I wneud hyn, mae angen i chi fwyta bwydydd â siwgr ac sy'n cynnwys llawer o garbohydradau, y gellir eu treulio'n hawdd. Gellir cyflwyno toddiant glwcagon a dextrose i'r corff.

Os yw person wedi syrthio i goma, yna mae angen i chi chwistrellu toddiant dextrose wedi'i addasu nes bod y sefyllfa'n gwella.

Efallai y bydd rhai pobl yn datblygu adweithiau alergaidd i'r defnydd o gyffuriau a addaswyd yn enetig ag inswlin. Gall y symptomau gynnwys cychod gwenyn, chwyddo, colli cryfder, pwysedd gwaed isel, diffyg anadl, brech, twymyn, a chosi.

Mewn rhai achosion, mae hypoglycemia a choma yn digwydd. Gall problemau gyda'r ymwybyddiaeth ddynol a hyd yn oed coma ddigwydd. Os collodd claf feddyginiaeth, yna fe allai ddatblygu hyperglycemia.

Mae'n ymddangos oherwydd dosau isel rhagarweiniol, gyda datblygiad ffenomenau heintus yn y corff, a hefyd os na fyddwch yn cadw at reolau'r diet.

Mewn rhai achosion, gall y claf ddatblygu lipodystroffi yn y lleoedd lle mae'r cyffur yn cael ei roi.

Ar ddechrau'r defnydd o'r cyffur, gall puffiness, diffyg dŵr, cysgadrwydd, a difetha archwaeth ddigwydd. Ond dros dro yw'r ffenomenau hyn.

Mae defnyddio eilydd yn lle inswlin naturiol, fel sylwedd wedi'i beiriannu'n enetig, yn ychwanegiad rhagorol at drin diabetes.

Mae'n helpu i leihau lefel y siwgr oherwydd y ffaith bod glwcos yn cael ei amsugno'n fwy gan y celloedd, ac mae prosesau ei gludiant yn newid. Ond mae angen defnyddio'r cyffuriau hyn yn llym yn ôl presgripsiwn y meddyg, oherwydd

gallant achosi effeithiau iechyd digroeso i'r claf.

O beth mae inswlin yn cael ei wneud?

Inswlin yw'r prif feddyginiaeth ar gyfer trin diabetes math 1. Weithiau fe'i defnyddir hefyd i sefydlogi cyflwr y claf a gwella ei les yn yr ail fath o glefyd. Mae'r sylwedd hwn yn ôl ei natur yn hormon sy'n gallu effeithio ar metaboledd carbohydrad mewn dosau bach.

Fel rheol, mae'r pancreas yn cynhyrchu digon o inswlin, sy'n helpu i gynnal lefel ffisiolegol siwgr gwaed. Ond gydag anhwylderau endocrin difrifol, yr unig gyfle i helpu'r claf yn aml yw union bigiadau inswlin.

Yn anffodus, mae'n amhosibl ei gymryd ar lafar (ar ffurf tabledi), gan ei fod wedi'i ddinistrio'n llwyr yn y llwybr treulio ac yn colli ei werth biolegol.

Paratoadau a gafwyd o ddeunyddiau crai sy'n tarddu o anifeiliaid

Mae cael yr hormon hwn o pancreas moch a gwartheg yn hen dechnoleg na ddefnyddir yn aml heddiw.

Mae hyn oherwydd ansawdd isel y feddyginiaeth a dderbynnir, ei thueddiad i achosi adweithiau alergaidd a graddfa buro annigonol.

Y gwir yw, gan fod yr hormon yn sylwedd protein, mae'n cynnwys set benodol o asidau amino.

Mae'r inswlin a gynhyrchir yng nghorff y mochyn yn wahanol yng nghyfansoddiad asid amino i inswlin dynol gan 1 asid amino, ac inswlin buchol erbyn 3.

Ar ddechrau a chanol yr 20fed ganrif, pan nad oedd cyffuriau tebyg yn bodoli, roedd hyd yn oed inswlin o'r fath yn ddatblygiad arloesol mewn meddygaeth ac yn caniatáu mynd â thriniaeth diabetig i lefel newydd. Roedd hormonau a gafwyd trwy'r dull hwn yn lleihau siwgr yn y gwaed, fodd bynnag, roeddent yn aml yn achosi sgîl-effeithiau ac alergeddau.

Effeithiodd gwahaniaethau yng nghyfansoddiad asidau amino ac amhureddau yn y feddyginiaeth ar gyflwr cleifion, yn enwedig yn y categorïau cleifion mwy agored i niwed (plant a'r henoed).

Rheswm arall dros oddefgarwch gwael inswlin o'r fath yw presenoldeb ei ragflaenydd anactif yn y cyffur (proinsulin), a oedd yn amhosibl cael gwared arno yn yr amrywiad cyffuriau hwn.

Y dyddiau hyn, mae yna inswlinau porc datblygedig sy'n amddifad o'r diffygion hyn. Fe'u ceir o pancreas mochyn, ond ar ôl hynny maent yn destun prosesu a phuro ychwanegol. Maent yn aml-gydran ac yn cynnwys ysgarthion.

Nid yw inswlin porc wedi'i addasu yn ddim gwahanol i'r hormon dynol, felly mae'n dal i gael ei ddefnyddio'n ymarferol

Mae cyffuriau o'r fath yn cael eu goddef gan gleifion yn llawer gwell ac yn ymarferol nid ydynt yn achosi adweithiau niweidiol, nid ydynt yn atal y system imiwnedd ac yn lleihau siwgr gwaed yn effeithiol. Ni ddefnyddir inswlin buchol mewn meddygaeth heddiw, oherwydd oherwydd ei strwythur tramor mae'n effeithio'n negyddol ar systemau imiwnedd a systemau eraill y corff dynol.

Inswlin Peirianneg Genetig

Mae inswlin dynol, a ddefnyddir ar gyfer diabetig, ar raddfa ddiwydiannol ar gael mewn dwy ffordd:

Amodau storio inswlin

• defnyddio triniaeth ensymatig o inswlin mochyn,
• gan ddefnyddio mathau o Escherichia coli neu furum a addaswyd yn enetig.

Gyda newid ffisiocemegol, mae moleciwlau inswlin mochyn o dan weithred ensymau arbennig yn dod yn union yr un fath ag inswlin dynol. Nid yw cyfansoddiad asid amino y paratoad sy'n deillio o hyn yn wahanol i gyfansoddiad yr hormon naturiol sy'n cael ei gynhyrchu yn y corff dynol.

Yn ystod y broses weithgynhyrchu, mae'r feddyginiaeth yn cael ei phuro'n uchel, felly nid yw'n achosi adweithiau alergaidd nac amlygiadau annymunol eraill.

Ond yn amlaf, ceir inswlin gan ddefnyddio micro-organebau wedi'u haddasu (wedi'u haddasu'n enetig). Gan ddefnyddio dulliau biotechnolegol, mae bacteria neu furum yn cael eu haddasu yn y fath fodd fel eu bod nhw eu hunain yn gallu cynhyrchu inswlin.

Yn ogystal â chynhyrchu inswlin ei hun, mae ei buro yn chwarae rhan bwysig. Fel nad yw'r cyffur yn achosi unrhyw adweithiau alergaidd ac ymfflamychol, mae angen monitro purdeb straenau micro-organebau a'r holl doddiannau ar bob cam, yn ogystal â'r cynhwysion a ddefnyddir.

Mae 2 ddull ar gyfer cynhyrchu inswlin o'r fath. Mae'r cyntaf ohonynt yn seiliedig ar ddefnyddio dau fath gwahanol (rhywogaeth) o un micro-organeb.

Mae pob un ohonynt yn syntheseiddio un gadwyn yn unig o'r moleciwl hormon DNA (dim ond dwy ohonynt sydd, ac maent wedi'u troelli gyda'i gilydd).

Yna mae'r cadwyni hyn wedi'u cysylltu, ac yn yr hydoddiant sy'n deillio o hyn mae eisoes yn bosibl gwahanu'r ffurfiau gweithredol o inswlin oddi wrth y rhai nad oes iddynt unrhyw arwyddocâd biolegol.

Mae'r ail ffordd i gael y feddyginiaeth gan ddefnyddio Escherichia coli neu furum yn seiliedig ar y ffaith bod y microb yn cynhyrchu inswlin anactif gyntaf (hynny yw, ei ragflaenydd yw proinsulin). Yna, gan ddefnyddio triniaeth ensymatig, mae'r ffurflen hon yn cael ei actifadu a'i defnyddio mewn meddygaeth.

Dylai personél sydd â mynediad at rai cyfleusterau cynhyrchu bob amser gael eu gwisgo mewn siwt amddiffynnol di-haint, sy'n dileu cyswllt y cyffur â hylifau biolegol dynol.

Mae'r holl brosesau hyn fel arfer yn awtomataidd, mae aer ac mae'r holl arwynebau sydd mewn cysylltiad ag ampwlau a ffiolau yn ddi-haint, ac mae llinellau ag offer wedi'u selio'n hermetig.

Mae dulliau biotechnoleg yn galluogi gwyddonwyr i feddwl am atebion amgen i ddiabetes.

Er enghraifft, hyd yma, mae astudiaethau preclinical o gynhyrchu celloedd beta pancreatig artiffisial yn cael eu cynnal, y gellir eu cael trwy ddefnyddio dulliau peirianneg genetig.

Efallai yn y dyfodol y cânt eu defnyddio i wella gweithrediad yr organ hon mewn person sâl.

Mae cynhyrchu paratoadau inswlin modern yn broses dechnolegol gymhleth sy'n cynnwys awtomeiddio a chyn lleied o ymyrraeth ddynol â phosibl

Cydrannau ychwanegol

Mae cynhyrchu inswlin heb ysgarthion yn y byd modern bron yn amhosibl dychmygu, oherwydd gallant wella ei briodweddau cemegol, ymestyn yr amser gweithredu a chyflawni purdeb uchel.

Yn ôl eu priodweddau, gellir rhannu'r holl gynhwysion ychwanegol i'r dosbarthiadau canlynol:

• estynwyr (sylweddau a ddefnyddir i ddarparu cyfnod hirach o weithredu'r cyffur),
• cydrannau diheintydd
• sefydlogwyr, oherwydd yr asidedd gorau posibl sy'n cael ei gynnal yn y toddiant cyffuriau.

Ychwanegion estynedig

Mae yna inswlinau hir-weithredol y mae eu gweithgaredd biolegol yn para am 8 i 42 awr (yn dibynnu ar grŵp y cyffur). Cyflawnir yr effaith hon oherwydd ychwanegu sylweddau arbennig - estynwyr i'r toddiant pigiad. Yn fwyaf aml, defnyddir un o'r cyfansoddion canlynol at y diben hwn:

Mae proteinau sy'n estyn gweithred y cyffur yn cael eu puro'n fanwl ac yn isel-alergenig (er enghraifft, protamin). Nid yw halwynau sinc hefyd yn effeithio'n andwyol ar weithgaredd inswlin na lles dynol.

Mae diheintyddion yng nghyfansoddiad inswlin yn angenrheidiol fel nad yw'r fflora microbaidd yn lluosi wrth eu storio a'u defnyddio ynddo. Mae'r sylweddau hyn yn gadwolion ac yn sicrhau cadw gweithgaredd biolegol y cyffur.

Yn ogystal, os yw'r claf yn gweinyddu'r hormon o un ffiol iddo'i hun yn unig, yna gall y feddyginiaeth bara am sawl diwrnod.

Oherwydd cydrannau gwrthfacterol o ansawdd uchel, ni fydd angen iddo daflu cyffur nas defnyddiwyd oherwydd y posibilrwydd damcaniaethol o atgenhedlu mewn toddiant o ficrobau.

Gellir defnyddio'r sylweddau canlynol fel diheintyddion wrth gynhyrchu inswlin:

Os yw'r toddiant yn cynnwys ïonau sinc, maent hefyd yn gweithredu fel cadwolyn ychwanegol oherwydd eu priodweddau gwrthficrobaidd

Ar gyfer cynhyrchu pob math o inswlin, mae rhai cydrannau diheintydd yn addas. Rhaid ymchwilio i'w rhyngweithio â'r hormon ar gam treialon lliniarol, gan na ddylai'r cadwolyn amharu ar weithgaredd biolegol inswlin nac effeithio'n negyddol ar ei briodweddau fel arall.

Mae defnyddio cadwolion yn y rhan fwyaf o achosion yn caniatáu i'r hormon gael ei roi o dan y croen heb driniaeth ymlaen llaw gydag alcohol neu wrthseptigau eraill (mae'r gwneuthurwr fel arfer yn cyfeirio at hyn yn y cyfarwyddiadau).

Mae hyn yn symleiddio'r broses o roi'r cyffur ac yn lleihau nifer y triniaethau paratoadol cyn y pigiad ei hun.

Ond dim ond os yw'r toddiant yn cael ei weinyddu gan ddefnyddio chwistrell inswlin unigol gyda nodwydd denau y mae'r argymhelliad hwn yn gweithio.

Sefydlogi

Mae sefydlogwyr yn angenrheidiol fel bod pH yr hydoddiant yn cael ei gynnal ar lefel benodol. Mae cadwraeth y cyffur, ei weithgaredd a sefydlogrwydd priodweddau cemegol yn dibynnu ar lefel yr asidedd. Wrth weithgynhyrchu hormon pigiad ar gyfer cleifion â diabetes, defnyddir ffosffadau fel arfer at y diben hwn.

Ar gyfer inswlin â sinc, nid oes angen sefydlogwyr toddiant bob amser, gan fod ïonau metel yn helpu i gynnal y cydbwysedd angenrheidiol.

Serch hynny, os cânt eu defnyddio, yna defnyddir cyfansoddion cemegol eraill yn lle ffosffadau, gan fod cyfuniad o'r sylweddau hyn yn arwain at wlybaniaeth ac anaddasrwydd y cyffur.

Eiddo pwysig a ddangosir i'r holl sefydlogwyr yw diogelwch a'r anallu i ymrwymo i unrhyw adweithiau ag inswlin.

Dylai endocrinolegydd cymwys ddelio â dewis cyffuriau chwistrelladwy ar gyfer diabetes ar gyfer pob claf unigol.

Tasg inswlin yw nid yn unig cynnal lefel arferol o siwgr yn y gwaed, ond hefyd i beidio â niweidio organau a systemau eraill. Dylai'r cyffur fod yn niwtral yn gemegol, yn alergenig isel ac yn ddelfrydol yn fforddiadwy.

Mae hefyd yn eithaf cyfleus os gellir cymysgu'r inswlin a ddewiswyd gyda'i fersiynau eraill yn ôl hyd y gweithredu.

Cael inswlin, dulliau peirianneg enetig, Biotechnoleg - Gwaith Cwrs

1. Strwythur a swyddogaethau inswlin 5

1.1. Strwythur y moleciwl inswlin 5

1.2. Arwyddocâd biolegol inswlin 7

1.3. Biosynthesis Inswlin 8

2. synthesis inswlin peirianneg enetig 10

2.1. Defnyddio dulliau peirianneg genetig ar gyfer synthesis cyffuriau 10

2.2. Dulliau Peirianneg Genetig 11

2.3. Cynhyrchu inswlin peirianneg enetig 14